小鼠骨髓间充质细胞传代消化问题

tangyvhuang

小鼠的消化比较费劲，貌似动物个头越大越好消化，不知道是不是这样，我这里是这样，人的最好消化了。* N+ N0 q1 y# v  i+ E
对于小鼠我一般都是加edta的，加入酶之前先用pbs洗两遍细胞然后再加入酶去消化，

寒小溪

回复 xiaozhu86 的帖子' U: J% a" H# m3 I6 Q
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嗯  今天去换了液  虽然细胞状态还行   但明显没有原代的梭了  应该主要还是消化时间过长的原因吧

寒小溪

回复 xiaozhu86 的帖子% V1 z7 e( z% j1 |7 l8 x# O
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嗯  今天换液看了下   细胞状态还好   但形态没有原代那么梭了  可能是消化时间过长的原因吧

寒小溪

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哦   这样子   谢谢   下次试试

xiaozhu86

回复 寒小溪 的帖子2 b4 Q* L( G- N  M1 Y' w
$ u6 ]+ c! l+ j. ^1 W
你可以试下，先用pbs在孵箱内孵育10到15分钟（完全去除血清的影响），然后再用热的胰酶消化，加入胰酶后用手不断平搓培养瓶底部，迅速就能消化下来~希望你的细胞状态会牛牛~O(∩_∩)O~

寒小溪

回复 xiaozhu86 的帖子) U+ y/ i: `5 v7 F
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我又提了一批原代   可以试试哈   谢谢撒

xiaozhu86

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( W6 U) ^2 g8 F( ~
6 M, o2 |5 q5 d/ [: ^呵呵，不客气啦~共同学习~

hfl1123

消化时间过长会带有许多杂细胞

李1二

我们做的时候一开始也加了EDTA，后来觉得好像状态不是很好就只用0.25%胰酶，放进37度培养箱内，一般3-5分钟，镜下看细胞变圆未脱落就终止，之后吹打的时候要小心，动作要轻柔，尽量不起泡。

tigerfish

同意楼上Typsin EDTA毒性相对来说比较大，一般我用3分钟就已经可以全部消化下来了，如果超过5分钟都还没下来的细胞估计就算最后下来也不会好好长了。
0 |  ]- R( b  s" v5 \+ U建议楼主试试看Invitrogen的TrypLE™ Express，这个贵一点，但是性质比较温和，但是消化效率比较高。建议贵重样本用这个来消化