鼠骨髓间充质干细胞分离问题

大海

回复 king8 的帖子3 L% |: B, _8 V7 K& _
' }% X6 b9 X* H. Q  K8 m
一般24小时就可以贴壁 但是刚贴壁细胞数量少 且贴的不牢可以三五天再换液都没问题 要多尝试总结( i" {' K4 M* V& p! k: e

taxuewuge

我做的是SD大鼠,分离后的第二天就看到细胞贴壁了，建议用全骨髓离心法，我原来也用percoll，分离出来的细胞太少了

生物化学zy

回复 alioli 的帖子2 ^' S, e5 I; H6 Q( S/ ]# }

& ~. z3 E( ?5 C全骨髓培养小鼠的MSC细胞,原代换液以后,贴上的有MSC胆识还有很多的杂细胞,杂细胞如何去掉呀?另外我用六孔板培养大概多久?原代细胞可以长满?还有就是MSC是不是不能长的太慢,是不是不能超过80%?

生物化学zy

回复 郝晓英 的帖子" b7 {% x; Q9 k$ ~9 ?

- p3 e6 O3 m& L& f2 {( `- u; [$ J想问一下,密度梯度离心后获得的单核细胞,铺板后3天换液后还是有很多的杂细胞咋办?杂细胞是不是可以不用管,继续培养就行,使用a-MEM+10%FBS是否就行?

liweitiky

我取小鼠骨髓贴壁法培养的步骤. R. a# _" c0 j; `1 A, [$ z
1 断颈处死后75%酒精浸泡5-10min，环形剥离双下肢皮肤,取股骨及胫骨，以保证细胞量充足，注意不要弄骨折了。
6 z# T3 A9 s/ Z, g: k% Y* Y3 q2用纱布擦除骨上附着的肌肉，尽量擦干净，注意无菌操作。无菌盐水冲洗3遍，剪去骨端（尽量剪少点，能暴露髓腔就行），将骨移入含培养基的培养皿，镊子夹持骨，1ml注射器吸取培养基从一端冲洗髓腔，注意先确认髓腔通畅!0 @3 X( T1 Z8 O. `
3 将冲出后的细胞悬液离心（1000rpm，5min），可见管底部大量的乳白色细胞沉淀，上层为红细胞层，去上清，沉淀以5ml含血清培养基重悬，接种一瓶6 X0 ]6 U3 G9 n  Z% N& X1 f) y7 d
4 2天后换全液，根据经验，7天左右可传代。- l$ |3 u/ T: E6 p

jxydiandian

我们做过人的骨髓间充质培养，个体差异特别大，有的接种后24h就可以换液，细胞形态都挺好，增殖也挺快，有的72h才能见到贴壁的，换完液之后慢慢培养，也能长得很好，所以说，什么时候换液也是不绝对的，还要看个体情况，老鼠也是这样吧，跟鼠龄啊什么的也有很大关系，另外建议密度还是多一点比较好！

郝晓英

回复 生物化学zy 的帖子1 I/ B" x. C, P. @
. ?( s  V/ b1 ?, P* y( x5 s: a4 s$ c
对  继续用你说的培养液样就可以  建议用进口血清
, G4 C% P5 q  t4 ]3 |$ z杂细胞就是通过换液、传代前用pbs轻吹打   以及严格控制消化时间和胰酶的量来进一步纯化   1ml 20到30秒左右

湖南干细胞

回复 jxydiandian 的帖子
1 F& |5 `5 {* B; D/ g) n% x
1 `0 e9 h, n: T  i; v& A0 T8 F2 p我看了这个40多页的间充质干细胞培养，你的总结让我觉得茅舍顿开，谢谢。

na6021023

补充一点，现在又市售小鼠间充质干细胞，分离好的。如果允许的话可以买现成的啊！我买的SD大鼠MSC干细胞稳定表达GFP，3208元一支，含7.5*10^5个细胞