求助:鼠胚胎干细胞容易分化是怎么回事

chliu

一种可能是细胞本身不好，有分化倾向
. F* b- D6 e, Y7 G8 {另一方面，饲养层要分布均匀，状态好，铺满，最好多一些，密一些。

yangpan521

回复 干细胞狂想 的帖子* W. l2 ~7 y, r$ g5 y" u% a
! a7 X, U) @8 |' @/ }  E
文献只是参考而已，但实际还要看细胞的状态，我们实验室养小鼠的胚胎干细胞就用，DMEM + 2mM 谷氨酰胺 (Gibco) + 2mM丙酮酸钠（Gibco) + 1%非必须氨基酸(Gibco) + 0.1 mM β-巯基乙醇+ 1000U/mL LIF (ESGRO, Chemicon International) + 10% FBS（Hyclone澳大利亚原装进口，Cat No. SH30084.03) + 1%青链霉素 (Gibco)。效果很好，但用KSR却不能达到相应的效果。

hibino

1. 不要用血清，用KSR 或者N2+B27（GIBCO）。因为血清的批次之间有差异的7 \0 c( X  y: x3 l3 y. w
2. 不同细胞系的培养条件不一样的，如E14可以用LIF培养，B6必须用LIF加CHIR99021.请告知您的ES的品系" Q2 t; g4 W+ z% _( b8 b, ?- W" F" F
3.L-G 请换为gulamax（GIBCO），稳定性极佳也不贵。我吃过L-G的亏浪费了整整半年时间，L-G最好是现用现配，4度时降解速度是按天算的。
, j& U& G' O8 h' L+ T其他楼下补充

meiying3061

干细胞的状态饲养层是最重要的，密度不能希也不能过密；
  Z! G3 F+ g# A: J! D/ }2 F' P6 ]此外传代时间也很重要，我一般隔2天传代一次，如果再多长一天就会出现楼主说的情况；
+ q3 I% y( W% @2 @, ~我的培养体系用的是15%的gibco 的ES级胎牛，GIBCO的ko-dmem，其他都差不多，总之血清也很重要

yaner

传代时接种希一些试试

lhw7514093

一般在48小时内就要传代的，培养时间过长而不传代很可能会分化

zhusealin

跟血清和饲养层状态有关，血清要用ES级别的

sarah19860420

通过最近看论坛里的帖子，觉得楼主最有可能存在的问题就是血清和饲养层了。

sarah19860420

我们这里培养胚胎干细胞以及IPS是选择用血清替代物的。其他的使用血清

sarah19860420

我们这里培养胚胎干细胞以及IPS是选择用血清替代物的。其他的使用血清