求助：大鼠骨髓间充质干细胞为什么总是老化了--多图

郝晓英

我觉得你可以先传代看看  我前面养过一批细胞  第一代的时候状态还不怎么样  有点类似你这种情况  但是稍微好一些  但是第二代的时候状态就比较好   其实建议培养液自己配   买的不一定特别好  双抗还是要加的血清GIBCO的就可以   10099

hxf_86

我觉得应该是胰酶的问题，因为我自己现在养细胞的一个经历就是这样……9 f2 }  n# j9 i2 Y! K% l0 q0 Y7 k
共勉

illidancui

回复 hxf_86 的帖子" L8 |; y3 D8 E) B

/ f+ M5 X1 E# Q% D$ ~0 Q; w请问楼上具体是胰酶什么问题。浓度过高还是什么？

hemu00

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3 y+ z7 h) ?$ w# D! `" h. P
- U+ V- @/ G; G$ U; n原代接种的细胞数量应该是不少的，方法是很多前辈推荐的（一只老鼠双侧股骨和胫骨冲出来的细胞平均接种到两瓶T25培养瓶）；DMEM/F12培养的第三天就80%融合了 很快  比文献说的第七天左右80%融合快多了。这样的话是不是接种的密度太大了呢？至于胰酶的消化问题，没有消化过的时候也不行（还有很多贴壁细胞就终止了），很是迷惑为啥细胞还是长不好

hemu00

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* v& g8 F! V" K% }! Z: A3 S# v4 |
; s9 w5 S( w$ U$ Q6 \谢谢英姐指导！下次换换自己配的培养基试试。现在传代之后是一代不如一代，和消化还是有关系的。

hemu00

回复 hxf_86 的帖子5 f4 \  J( m) n; U' r

9 Q8 t5 a- S0 m+ p谢谢建议，多交流，祝实验顺利！

hxf_86

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5 p% [, N% p9 m+ J6 K首先是胰酶本身作用过强，还有就是胰酶消化时间过长。4 i; H) S0 @( |% m& n7 v
我试过消化时间短的，但是细胞死活吹打不下来……

illidancui

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/ T6 R* V! z& y0 _% A8 Q# `0 M( U+ e) C
那求教胰酶问题何解？我的问题和楼主相似，但是原代很好，一消化就不行了。浓度低了细胞又吹不散，高了又控制不好时间。

illidancui

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, N8 m$ U" a' ~/ t& R+ }9 |6 @% t+ G, B- E, @8 `% n! }, e1 a
真心求教，提前答谢下。

viv2005

我感觉我养的rat MSC跟你的图7很像，5代之后如你所说立体感不强，但是仍然可以诱导成骨