求助：大鼠骨髓间充质干细胞为什么总是老化了--多图

郝晓英

我觉得你可以先传代看看  我前面养过一批细胞  第一代的时候状态还不怎么样  有点类似你这种情况  但是稍微好一些  但是第二代的时候状态就比较好   其实建议培养液自己配   买的不一定特别好  双抗还是要加的血清GIBCO的就可以   10099

hxf_86

我觉得应该是胰酶的问题，因为我自己现在养细胞的一个经历就是这样……3 |  q, B- [3 u1 M) N
共勉

illidancui

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1 E. Y% E  D& f8 r( [+ R5 G* D- r
请问楼上具体是胰酶什么问题。浓度过高还是什么？

hemu00

回复 kgx1986 的帖子" A9 P, V2 G/ I, [0 W

1 v' O+ c" E, }原代接种的细胞数量应该是不少的，方法是很多前辈推荐的（一只老鼠双侧股骨和胫骨冲出来的细胞平均接种到两瓶T25培养瓶）；DMEM/F12培养的第三天就80%融合了 很快  比文献说的第七天左右80%融合快多了。这样的话是不是接种的密度太大了呢？至于胰酶的消化问题，没有消化过的时候也不行（还有很多贴壁细胞就终止了），很是迷惑为啥细胞还是长不好

hemu00

回复 郝晓英 的帖子9 M( v8 \+ ^6 X

4 e% u* ]9 M  B  y  r) ?; c谢谢英姐指导！下次换换自己配的培养基试试。现在传代之后是一代不如一代，和消化还是有关系的。

hemu00

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  T3 u1 n! w% e, N
. B2 X8 n. o1 \* S& ]: R0 c谢谢建议，多交流，祝实验顺利！

hxf_86

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: F. z1 K2 }) n4 K) f
$ F+ ]' Z5 M+ G: k) O首先是胰酶本身作用过强，还有就是胰酶消化时间过长。  b4 F, n3 J; ^+ K+ Y$ |
我试过消化时间短的，但是细胞死活吹打不下来……

illidancui

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3 L$ L( u1 b. Z7 H
' ^/ j  a% e% i8 N/ ^# U' F那求教胰酶问题何解？我的问题和楼主相似，但是原代很好，一消化就不行了。浓度低了细胞又吹不散，高了又控制不好时间。

illidancui

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. \; D+ m# N, V# g3 a, G! n1 s; n4 q8 T% V7 y  B$ E7 u
真心求教，提前答谢下。

viv2005

我感觉我养的rat MSC跟你的图7很像，5代之后如你所说立体感不强，但是仍然可以诱导成骨