急用丝裂霉素过夜处理MEF

youyou315

我见过有的实验室用1ug/ml的浓度处理过夜，不过我没有试过，仅供楼主参考。

ldy689689

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我们都是处理两个小时左右，要过夜处理也太夸张了吧

ldy689689

我们都是处理两个小时左右，你处理过夜也太夸张了吧！

是鸟就要去飞

丝裂霉素C，10微克每毫升处理两小时。处理太长时间滋养层细胞的状态不是太好，且以前看过同种浓度不同时间处理滋养层的文献。处理时间长了，滋养层毒性就会增大。因为细胞代谢过程中，部分MMC会被吸收进去。但是你冻存时，滋养层体内的MMC不一定全部释放出来，所以我们组都是提前一天铺滋养层。处理时间短了，滋养层有可能被抑制住，这样情路就会很糟。它的分裂会带着干细胞的分化。所以还是严格的来做吧，祝你成功！

tigerfish

我个人不同意过夜处理。: ^. i1 C6 h6 W5 n) ~0 R7 d
我目前的程序是0.5mg/ml, 2小时，用起来没问题

momocy

我们做的时候是处理3个小时。丝裂霉素 C 储存液（1mg/ml）用 MEF 培养基稀释3 S, f' {+ Q( g
100倍即为丝裂霉素 C 工作液（工作浓度为 10μg/ml）$ c3 C  D+ D& g: E
吸掉 P3代 MEF 培养皿中的培养基，每个 15cm 培养皿加 15ml 丝裂霉素C 工作
  y: [: a& Y$ I  \液，放 37℃，CO2培养箱中处理 3个小时。 然后要加5ml DPBS 洗 3遍。

sizhengliu

回复 momocy 的帖子
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请问你们是MMC处理后不重新消化铺板吗？

momocy

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# i; s9 f* v' w' @, ~
7 p$ l9 K1 ?3 [; M' g处理3个小时以后就用PBS洗3次，然后就冻存了

houbara

10ug/ml,处理2-3小时，完后PBS（-）洗三次。严禁过夜处理。

shangchunhua

我的操作和momocy比较接近，用10ug/ml的MMC处理MEF3个小时，用DPBS清洗五遍，然后消化，如果有实验需要就马上铺板，其余的细胞冻存起来