提总RNA问题

pla269

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# L2 a; S$ Z6 c' j# |  G4 I! D& O你用什么牌子的trizol

amosummer

靠经验的了。也可以来个摸索试验，不同体积试试，哪个效果好。

huangcong1988

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5 I" g% t" H4 Y/ X. R( o1 |. l9 n  ], m' j
有国内的，也有国外的，国内比较便宜，进口的较贵，但是经验告诉我们，两到三微升足矣，多了浪费，少了又起不到抑制RNA酶活性的效果，无论国内还是进口，都行，两到三毫升，具体特殊情况具体再看，我看看牌子去。。。

huangcong1988

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5 ^- {+ F6 j" W# D2 f" m6 T, DScotland，UK的

endless-caas

回复 huangcong1988 的帖子* ]9 t  m2 r- w$ g' k* O

8 c7 O; v1 y6 d" C8 g交流一下下，你们磨样用的是什么样的棒？是用的一次性的塑料的还是用的电动的铁棒的呢？其实对于磨样，我有时提的时候，就是看的经验，觉得差不多了就行了，但是，可能仅从眼观上看肯定是会有误差的，你们一般是以什么标准呢？磨样加液氮好还是不加好？如果加的话，一定要磨成粉吗？对于磨样过程中样品的飞贱你们怎么看待呢？

huangcong1988

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9 Q& f& c5 H1 X9 Z& m- ]你们磨的是植物组织还是动物组织？我们磨的是动物组织，用的是瓷棒，跟研钵一样的瓷的。
' }: z; Q" d5 Q, f* N) C# Y$ P! J7 I* j* @9 U' U! Y
是啊，磨样多少一般都是凭经验，大概可以就行，一般就是绿豆粒那么大就行，其实黄豆粒大也行，主要是加入trizol的量有限，磨太多样不仅浪费体力，trizol对于RNA的抑制作用也不能正常发挥，所以还是尽量不要太多，用肉眼看，一般那个小勺三分之一就够。7 H9 X3 l; r2 p% g' K0 [. X
磨样肯定是要在液氮中磨的，取出样的时候也要把样放在液氮中，其实比较标准的磨样，整个过程都是在液氮中进行，所以边磨要不断加氮，不要使研钵中的氮干掉，还有开始要加氮到放有研磨棒的研钵中预冷。
5 R0 S* V7 f" u$ G8 k这些都是个人经验，你们可以试试  i( h) }$ z2 M4 U4 t- G! @
样品最好是磨得细一点比较好，那样提RNA的效果也好一点，而且尽量要缩短时间，因为时间一长，RNA肯定会降解，提的效果肯定受影响。) ^% [( R; l+ \1 Z
磨样过程中样品飞溅，如果说样品比较多，溅出去的就不管了，反正提RNA要不了那么多样，如果捡到研钵中会使样品污染，还有就是由于磨样需要很大力气，所以在所难免会使得氮啊，样品粉末啊，混合液啊溅得到处都是，最好在磨样之前在台面上铺几层一次性PE手套，这样使得台面比较干净，而且铺手套有一定缓冲作用，不至于使台面受损。

chliu

我们用invitrogen的，只要少于说明书上的样品的量，一般用1ml。

endless-caas

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OK，你的经验给我提供了一定的参考价值。其实我们提的也是动物组织，大小也就像你说的豆粒般大，不过，你们用研钵磨这么小的样，我觉得很厉害。我们时常是直接在1.5的离心管里面磨，但是就是不好做到一边磨一边加液氮，一般也就加一点就磨了，磨完就放冰上。可能还是提得少，所以，我提的结果有时候就是不太好，呵呵，学习了噢！

pla269

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& Q- z( q$ n/ A, ~# D. f
, d- f9 g  @+ M* [) W提成绿豆粒大，已经不小了，你有什么窍门吗
0 M  d! O9 H( Q5 z1 A. Y

huangcong1988

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7 F1 T. p$ j/ t1 C* Y+ O
  u( Y5 }7 m: _5 O貌似这个没什么窍门，就是磨样呗，多了就少取点，一般样品是足够的，而且比较多，所以磨样的时候如果样品溅出来，没事的，放弃那一点，要不了那么多，主要是样品分开时候比较难，分开之后可以选择性的放弃磨一部分