MEF的条件培养基可以保持小鼠胚胎干细胞的全能性吗

mayiwaiwai

回复 lipenix 的帖子$ m' c7 |+ P3 P3 l9 G1 A/ C

9 H9 }: y. Y/ p, `1 c- _同学可给出你用的培养基成分吗，我也想用饲养层试试养干细胞，做增殖。方便的话可以发下你的protocol吗，

mayiwaiwai

回复 shangchunhua 的帖子" M% {" D. |  _
$ }: o1 e6 }3 ^2 I2 S2 y. b& x7 x
请问什么是MEF的条件培养基呢，如何制备的，

lipenix

原来的MEF用完了，本周四我会重新做MEF，届时我会每步拍下照片，再写个过程发上来，可能要几周吧。

细胞海洋

回复 lipenix 的帖子
8 N( w8 `: M+ O& \* D$ }6 H& z: D. ^/ V# d9 n
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样) f& ], R* y$ g6 r

5 E- u$ r0 ^# _" G/ B' F否则他会看不到* m4 h, L0 ?3 @& F' Q8 P& ^* c

细胞海洋

回复 mayiwaiwai 的帖子3 n# o5 e5 Q$ p
, N! n+ q5 j/ i8 M0 P
看13楼

shangchunhua

回复 mayiwaiwai 的帖子
4 C- i+ h. p* H- r" [$ y' T; D( S
7 E' x* t, @$ o/ f0 S( J% I; i就是用培养过MEF的培养基用来饲养ES细胞，制MEF-conditioned medium
  Y- `$ C  i- V" S% f, c( m( ?3 R备方法如下：将灭活的MEF接种到铺有明胶的培养皿中，第二天换成mES培养基，24h后收集培养基，离心后用0.22um的滤头过滤除菌。按照上述方法收集七天条件培养基，储存在4℃冰箱备用。
: w& c8 D" K0 ]5 [- S

littleeley

我们实验室用的无MEF小鼠ESC培养, 0.2%明胶包被细胞培养板
5 a/ y7 r  A$ N! C- L5 \培养液: DMEM, 1 mM Sodium Pyruvate, 5% FBS (Invitrogen, 30044-333), 15% KSR (Invitrogen, 10828-028), 0.1 mM NEAA (Invitrogen, 11140-050), 0.1 mM β-ME (Invitrogen, 21985-023), 2 mM L-glu, 10 ng/ml LIF (Chemicon, )9 ?% v' \& q: C8 r2 ?* r6 D
细胞绝大多数保持不分化，可满足基本实验需求。

卢小小

很好很有帮助

卢小小

想问一下，dmem的货号是多少呀

wbj1983

回复 shangchunhua 的帖子/ h$ J- U+ _, P* r& }
) T3 a* s+ L3 W' F/ Y8 E! E$ E
答案肯定是否定的，因为小鼠ES要依赖LIF，如果培养基中不加LIF,ES细胞会分化的！