求助：原始生殖干细胞的传代方法

majing217

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原代的时候我用的是胰酶，之后传代我也出现过你的问题，克隆长不大，而且数量越来越少，而且传代在饲养层上，饲养层大量死亡，我现在也在找原因，希望多交流。我试着传代的方法有两种，一种是胰酶直接消化，另一种是挑克隆，效果都不好。

hxw123

传代时，用收集到的培养生殖腺细胞培养液与培养生殖干细胞的培养液混合后进行培养。

yuanyan2010

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" h- j1 }% C( X- E: E6 S) j" m/ O( H) c
多少天的生殖嵴，还有就是培养液能说下子吗

yuanyan2010

回复 yangpan521 的帖子2 `3 @% T) h( U2 @+ @1 ^2 o

* |/ l0 x, K$ r1 ?1.会不会培养液不适合，细胞分化了 2 .体细胞增殖比PGC快，增殖抑制了呢。我也想做的，也没成功，考虑把小克隆给挑出来养养看呢

yangpan521

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4 ?9 U$ C% d5 Q7 q4 w! S
) d0 N% ?8 h% f8 `2 ^6 U' D& {" Y1 u12.5天的生殖脊，培养液是干细胞培养液+ＧＤＮＦ（不只是什么东东，是老板给的，具体也没查到）

jhu132llh

回复 yangpan521 的帖子6 x  v/ C8 L% a! Y8 O

8 X* K) i0 w' B8 q% y4 }ＧＤＮＦ是神经生长因子

majing217

回复 yuanyan2010 的帖子; u* p0 ?* _: _- ~  J

* S5 W8 g0 `$ s% g! L. p) {5 R2 k我做的是猪的原始生殖细胞，现在取的是26天的胚胎，培养液是正常干细胞的培养液，但是没有加bFGF。

majing217

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; y( I+ L% E+ d. N" l( H7 N
7 D( F6 O' I+ c那你用这个培养液养出来的原始生殖干细胞状态怎么样?那个神经生长因子起得是什么作用啊？再就是你的干细胞培养液中加了多少量的bFGF?/ [  G# x) f, t4 k, @. A: `8 Q4 l

ellapan

个人看法，一是你的细胞浓度太低的话会导致克隆在生长和传代时逐渐萎缩而消失，二是你传代时怎么还要用酶消化那？不知是否有误？ 三是你的培养液的成分不适合干细胞的增殖，进而分化了。 可否就你的具体培养液和方法展示出来，这样大家也好有个参考！！

ellapan

哦 你是分离生殖干细胞时采用酶消化， 就猪的而言可否尝试针刺释放哪？% `$ u% o, G1 @4 g' V+ b3 W; I+ {5 J