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标题: 做流式，阴性细胞组荧光太强！不知为何？ [打印本页]

作者: swat334147161 时间: 2011-8-25 16:28 标题: 做流式，阴性细胞组荧光太强！不知为何？

本人在做EPCs(内皮祖细胞)流式细胞仪鉴定（CD34,CD133,vWF,）但做了几次做流式都不好，老师说我们的阴性细胞对照的荧光太强，正常不超过2%，但我们的居然有20%多，我以为是定容时没换枪头把染色的细胞不小心带进了阴性细胞组，但我们后来又重复了2遍，阴性细胞组的荧光还是太强，老师还问我们是不是做了双染！！我就纳闷了阴性细胞怎么会有这么强的荧光呢？我做的是SD大鼠原代培养的内皮祖细胞，难道是大鼠品种有问题？我消化细胞用的是不带EDTA的胰酶，我实在苦恼，***各位专家帮忙。。不胜感激。

作者: leisong12 时间: 2011-8-26 21:31

详细说说你的阴性对照是怎么设置的？

作者: swat334147161 时间: 2011-8-29 15:28

就是定容到500u,用PBS定容的，大约1万个细胞，没加任何荧光对照。

作者: RIVA2011 时间: 2011-8-30 14:40

我最近也在做，你用的是同型对照还是空白对照，最好详细说一下~

作者: zz091115 时间: 2011-8-30 14:45

你的细胞上样量偏小最好是10e6个细胞一管我之前做空白对照都只有1%的阳性率还有换换你的PBS 可能是这个沾染进去的很好奇你的流式抗体是选的什么公司的是单抗还是多抗是直标抗体还是什么之前我做大鼠就是抗体不好找换了小鼠

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