做流式，阴性细胞组荧光太强！不知为何？

swat334147161

本人在做EPCs(内皮祖细胞)流式细胞仪鉴定（CD34,CD133,vWF,）但做了几次做流式都不好，老师说我们的阴性细胞对照的荧光太强，正常不超过2%，但我们的居然有20%多，我以为是定容时没换枪头把染色的细胞不小心带进了阴性细胞组，但我们后来又重复了2遍，阴性细胞组的荧光还是太强，老师还问我们是不是做了双染！！我就纳闷了阴性细胞怎么会有这么强的荧光呢？我做的是SD大鼠原代培养的内皮祖细胞，难道是大鼠品种有问题？我消化细胞用的是不带EDTA的胰酶，我实在苦恼，***各位专家帮忙。。不胜感激。

leisong12

详细说说你的阴性对照是怎么设置的？

swat334147161

就是定容到500u,用PBS定容的，大约1万个细胞，没加任何荧光对照。

RIVA2011

我最近也在做，你用的是同型对照还是空白对照，最好详细说一下~

zz091115

你的细胞上样量偏小 最好是10e6个细胞一管 我之前做空白对照都只有1%的阳性率 还有换换你的PBS 可能是这个沾染进去的 很好奇你的流式抗体是选的什么公司的 是单抗还是多抗 是直标抗体还是什么 之前我做大鼠就是抗体不好找换了小鼠5 v: ~" U* M+ C