流式细胞术筛选后的细胞数量很少，怎么办？

daviddow

我没有用surface marker标记细胞，因此并不存在胰酶消化的问题。就是收集10^6细胞，要是平时收集，应该很多。可是流式细胞术筛选后，离心，看到很少。不知道是不是仪器的问题？不过我提RNA的时候，还是能在底层看到RNA的存在。

gh2010

10·6次方不少啊。我们sorting下来就10·5次方，离心也看不到pellet,但是不影响后面的实验，结果还是不错的
5 |/ E9 H% w0 C5 g还有可以检验一下机器计数是否准确

meister

只要方法对头，看没看见没有关系， 肉眼的分辨率有限

daviddow

怎么验证细胞计数呢？

daviddow

怎么验证细胞计数呢？

gh2010

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( {6 c0 k3 Q5 i) R
& q3 p1 _: v) U: Z. v' T4 f0 R限制稀释，我选的是带有GFP的细胞，然后计数，多数几次，得到大概数值，数的很痛苦

barley

用流式细胞分选后，细胞在流式细胞仪的鞘液内离心下来的困难会增加很多，所以常规的1200 10min很可能下不来，可以把体系稀释再一点，用小离心管，转速可以增加到2500左右，或离心力800g左右，当然也要看分选的什么细胞

daviddow

谢谢barley

C囡OO囡L

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, g4 e* r1 z) [+ x' O' U2 a$ y$ W2 }" N2 _" r" ^! l, m9 i0 b) ^
请问用小离心管是用多小的？我分选下来2组，一组是7*10^5个细胞（满满一管流式管），还有一组是7*10^6次方个细胞（2个半流式管），我老师用1200转离了好几次都下不来，估计被她倒掉了...我想问把体系稀释一点是什么意思？是直接把流式管里的细胞溶液混匀了分装到小离心管里离心吗？

细胞海洋

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