Trizol提取RNA比值偏低

wangzhiqi86

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这么短的时间是不会的，我经常这样，测出来的A260/A280不会超过2，大概1.8左右吧！

langziforever

回复 dmmwhb 的帖子8 c# H0 Y/ D/ {7 V5 S# N
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那就取决于你RNA的浓度了！把它稀释到你测量仪器的范围内就可以了，我一般会稀释稀释过50倍、100倍、200倍，然后终浓度在10ug/ml左右比较好！但主要还是看你测量仪器的精确范围了！太浓了会使操作时的误差增大，而且损失样品，太稀了测不准，受杂志影响很大！

827914734

我认为比值低应该还是污染，吸上清时不仅要注意不要吸到中间层，而且尽量不要重复吸，只吸一次就可。+ n4 f' e+ G' B! s( w; s* U
另外，干燥时间较短，我一般都20分钟左右，加DEPC水后，不需要等太长时间

cronos0910

75% 乙醇那步没做好, 比值才会那么低, 回溶的步骤我建议在4度10mins

xiaoyurly

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乙醇洗涤后挥发的时间太短了吧，没挥发干净会影响RNA质量的。我们一般都是尽量吸净乙醇残液，甚至用干净的吸水纸吸干，觅一个僻静之地室温挥发15min左右。溶解RNA时60-70°水浴助溶。

dmmwhb

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先谢谢你的回复，说明书上说的只晾5-10min，久了不容易溶解，还有就是在室温久了容易降解啊，不过我没试过这个，下次还是试试晾干久一点

ilovelife

同意dahui 的建议。大概3点建议：
7 a. a1 x$ S; N& K9 L- p( X- G1. 可以用75%乙醇洗两次，量用的大一些，上下颠倒几次，目的是把残留在管壁和RNA沉淀表面的盐去掉。最后一步去掉75%乙醇后，稍加离心，用10ul枪头吸去微量残液，室温晾干时切忌量得太干，否则及难容，观察到确实没有液体了，从最边缘开始有开始变白的迹象就加水溶解。
  ?" U& g& x0 u5 s' ~8 X, L$ K8 W2.换一批Trizol，氯仿和异丙醇试试，可以先从其他有成功经验的实验室借，用来做对比试验，一次替换一个对比元素，这样容易找原因。  `4 M2 K& H' o4 p4 G& V8 G
3.跑个电泳看RNA是否降解。
) k: W0 D$ L! v% H% _9 f, y祝你很快解决这个问题。

dmmwhb

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非常感谢ilove的建议