还是成纤维细胞培养的问题

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可以剪碎一点儿   用平常的胰酶浓度就可以了  

liufutang

老鼠是有点老了 我所试过的用6周的小鼠采用组织爬出的方法很好 现在已经培养半年基本建系了。要是消化方法的话我建议用0.125浓度来消化。

liufutang

老鼠是有点老了 我所试过的用6周的小鼠采用组织爬出的方法很好 现在已经培养半年基本建系了。要是消化方法的话我建议用0.125浓度来消化。

varing

剪碎点，用0.25%的胰酶消化15-20min，肯定有组织块，直接加到培养皿中，加常规培养液体积的1/3-1/2左右，培养液不要太多，让组织块贴好，第二天或者第三天贴好后加培养液至常规体积。
7 \5 |1 t- I: J6 g3 C$ Q4 a, F这个应该可以的

超级小葵

回复 liufutang 的帖子; X6 b& |" l2 w7 ^/ d

! p% N6 @$ }  O& F- ]谢谢

超级小葵

回复 varing 的帖子; R( b0 p7 r6 [" J' L% ?2 s& G

. ~3 k+ z9 f5 t好的，我试试，非常感谢

天枰2012

用的老鼠也真够老的!呵呵。应该可以分享出来的，只是可能需要时间长点（十天左右吧）。
, D! G% y1 m' N9 b+ B: z另外，如果加液晚的话，组织块太干了，也不会有细胞迁出的

请问十天左右是指贴壁时间吗？如果是贴壁时间怎么会这么长，还有人的又会是什么情况呢？

jane2011

组织块第二天就贴壁了，如果是人的，4天左右会有HFF爬出，13天左右收获HFF，爬出时间也根据取材人的年龄有所不同。还有你的皮肤组织处理的是否干净，如果有很多结缔组织或脂肪残留，也不容易爬出细胞。没做过鼠的，上面是人的皮肤的经验。

kastanie

做过好几次取皮肤原代成纤维细胞的试验了。个人感觉能不能成功最重要的一步是皮肤的组织碎块是不是贴壁。
- o, g) M' ~7 {- I& a  g我取的是人的皮肤成纤维细胞，没有加胰酶消化。具体步骤是：将皮肤减成小块，培养皿中放10min左右略微晾干，让皮肤快粘在培养皿壁上，然后缓缓加入少量培养基，37度培养，隔天再小心补点培养基，开头2-3天尽量不要去动培养皿，不要过多观察，防止组织块飘起来，一旦飘起来，我的经验是基本就成功不了了。