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楼主: youtellme
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11楼
发表于 2011-12-30 09:23 |只看该作者
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回复 南宫燚岚 的帖子
5 l% ]5 r: T% O* ^8 F9 J/ m# i# J) h! q
也不见得,不是分细胞,而是购买的血清已经处理方式,一般是4℃溶解,57℃30 min灭菌,但是像我们使用的HyClone的南美胎牛血清就无需灭菌,只需4度溶解(很重要,不然室温溶解产生大量蛋白沉淀)
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12楼
发表于 2011-12-30 10:02 |只看该作者
我们实验室谷氨酰胺统一配好后,根据配置培养液的用量进行分装。一般每支8ml,做好标记,放入-20度冰箱保存。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4度放置一周可降解50%。注意!
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13楼
发表于 2011-12-30 10:21 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子% N8 {7 x* u2 O' \% u1 d! u
& L! X2 _$ W  k3 A. i! {1 ^
对,是这样的。具体有什么样的讲究我也不清楚

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14楼
发表于 2011-12-30 11:40 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子
* g0 ~- A# k7 s% U2 d/ Q! E; k( P
是的。

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15楼
发表于 2012-1-4 09:03 |只看该作者
回复 meridian 的帖子, s0 m0 s1 G8 o7 P

/ d+ t  X) l7 c0 t9 B恩,是否需要其实问问厂家就行了……

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16楼
发表于 2012-1-9 14:36 |只看该作者
本帖最后由 dongxin 于 2012-1-9 14:39 编辑 " ], U, V: E, f7 Y4 [

: X8 H6 ~/ ~; C3 T补充两条
& K! F( d! W& a! ~2 J$ t0.1%Gelatin: 0.5克Gelatin溶于500mLPBS,121度灭菌30分钟,4度保存备用。1 }" M' I) v/ X8 ]
Ⅳ胶原酶(5mg/mL):100mgⅣ胶原酶溶于20mL DMEM/F12,0.22微米过滤,分装存于-20度备用。
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17楼
发表于 2012-2-10 15:12 |只看该作者
各种细胞因子应先配成使用浓度的500或1000倍,用DMEM或者PBS配制,配制过程要防止污染,因子一般都很少不用过滤,然后按50或100ul分装,-20度冻存,使用前室温化开,用完后马上冻于-20。: J& @' Y5 V! a$ ]$ _; Y
谷氨酰胺一般按100倍配制,PBS或生理盐水配制,过0.22um滤膜,1.5mlEP管分装后-20冻存,使用前化开并混匀(低温时谷氨酰胺会重新变成粉末沉于管底),用完后马上冻存。
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18楼
发表于 2012-2-10 16:13 |只看该作者
现在进口胎牛血清已经不需要灭活了,至于小牛血清和新生牛血清是否需要灭活还是需要咨询购买厂家。& V6 ~! w# _/ M! \" T" d
但是楼上说的4℃溶解确实很重要,我们实验室已经反复验证了很多次,室温溶解的会产生蛋白沉淀的。500ml的溶解后分装包装一定很重要,避免污染和反复冻融影响效果。
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