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楼主: youtellme
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发表于 2011-12-30 09:23 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子
, d; n+ z$ ?( ~8 `0 v" E2 c8 Y0 x
1 W# s& j: z, u( S  L8 ~也不见得,不是分细胞,而是购买的血清已经处理方式,一般是4℃溶解,57℃30 min灭菌,但是像我们使用的HyClone的南美胎牛血清就无需灭菌,只需4度溶解(很重要,不然室温溶解产生大量蛋白沉淀)
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发表于 2011-12-30 10:02 |只看该作者
我们实验室谷氨酰胺统一配好后,根据配置培养液的用量进行分装。一般每支8ml,做好标记,放入-20度冰箱保存。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4度放置一周可降解50%。注意!
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发表于 2011-12-30 10:21 |只看该作者
回复 南宫燚岚 的帖子8 g2 B# m+ o& W
$ A: L  x7 L' u% e
对,是这样的。具体有什么样的讲究我也不清楚

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发表于 2011-12-30 11:40 |只看该作者
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回复 南宫燚岚 的帖子1 Z( k5 ^! Q& t# u- D4 {$ Q
, o) j3 c' ^& l5 r& x- n, x6 k; }
是的。

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发表于 2012-1-4 09:03 |只看该作者
回复 meridian 的帖子# |7 x- [7 K+ K6 o- U
9 H' e% T/ v3 i4 a2 _2 X9 }$ V
恩,是否需要其实问问厂家就行了……

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发表于 2012-1-9 14:36 |只看该作者
本帖最后由 dongxin 于 2012-1-9 14:39 编辑 9 d3 A( d) J! I; J" q9 f1 a5 p* |
, n3 b; p# w: f! R: \' H; B( J
补充两条/ K8 s& g- d) j% n$ M
0.1%Gelatin: 0.5克Gelatin溶于500mLPBS,121度灭菌30分钟,4度保存备用。
6 r; {9 t0 y/ ^" R( b2 `, I, LⅣ胶原酶(5mg/mL):100mgⅣ胶原酶溶于20mL DMEM/F12,0.22微米过滤,分装存于-20度备用。
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发表于 2012-2-10 15:12 |只看该作者
各种细胞因子应先配成使用浓度的500或1000倍,用DMEM或者PBS配制,配制过程要防止污染,因子一般都很少不用过滤,然后按50或100ul分装,-20度冻存,使用前室温化开,用完后马上冻于-20。
! k3 i" ?7 D+ o/ K. b" S谷氨酰胺一般按100倍配制,PBS或生理盐水配制,过0.22um滤膜,1.5mlEP管分装后-20冻存,使用前化开并混匀(低温时谷氨酰胺会重新变成粉末沉于管底),用完后马上冻存。
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发表于 2012-2-10 16:13 |只看该作者
现在进口胎牛血清已经不需要灭活了,至于小牛血清和新生牛血清是否需要灭活还是需要咨询购买厂家。
! y6 p. g3 H( B  n. u& ?2 M但是楼上说的4℃溶解确实很重要,我们实验室已经反复验证了很多次,室温溶解的会产生蛋白沉淀的。500ml的溶解后分装包装一定很重要,避免污染和反复冻融影响效果。
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