胶原酶、accutase还是dispase？

Dongqin11

已找到Accutase包含了蛋白水解酶和胶原溶解酶，但是还是想问一下，它和0.05%Trypsin相比温和度怎么样？

也行天下

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# e2 L  y3 R/ h
accutase要比0.05%胰酶温和，但比胶原酶要强得多，比dispase也强，accutase是将iPS克隆消化成单细胞，我们在制作EB时用，饲养层和无饲养层培养的iPS细胞传代都用胶原酶。

lchanlon

if you culture ips cells in feeder, the collagenase IV is a good choice. But for feeder free, Accutase and dispase is not good. I suggest you use 0.5 mM EDTA in PBS. for 33mm dish, add 2ml of 0.5 mM EDTA, incubate at room temperature for 3-5 minutes, aspirate the EDTA. Then add 1 ml of medium using  1 ml pipet, pipet up and down to disassociate the ips cell and transfer into a new tube.
( J7 ~% H- P& s+ X6 K' C6 T; Y0 b4 t8 A7 B& `, \( {9 w
补充内容 (2012-9-22 10:12):; [4 E% ~) Q# `+ c& Q8 G
In our lab, it works well. this protocol from James A Thomson laboratory

sizhengliu

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; o7 [3 P/ i& u8 t4 f1 P
, T& X7 P9 a; ~( h$ C6 cthank you vary much!

shuishan

Accutase是胰酶的替代品，是含EDTA的PBS溶液
  q& w' d$ Y0 J- |1 R; Y

第一心音

经典的，胶原酶，不过要饲养层，不知道能不能帮助你

bubble_w

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3 C& p' x+ E, u2 u6 Y6 e
- j- m1 @. x, H小鼠的iPS选择胰酶或者accutase消化，人的iPS选择胶原酶4或者dispase，dispase消化的效果最温和了。我一直在用accutase，这个酶消化完的细胞是小的细胞团块，3个细胞左右，非常适合小鼠干细胞高比例传代，37度作用2-3分钟，消化程度刚刚好。accutase和dispase，gibco都有成品，买回来分装后就可以直接用，非常方便。accutase大概800左右，dispase貌似要3000？我记不清楚了。

sizhengliu

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! k( W. Z3 \! q( o- D
( U8 v% ^6 U- |! S( G, P& _+ }谢谢你的详细解答！我做人的ips，请教：胶原酶4的配置液体和使用浓度是什么？

sizhengliu

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+ O! x+ a' k+ X
& c5 z& u( X2 H+ I9 O9 c是的，请教：你认为在人的ips传代中，有必要去除feeder吗？

bubble_w

回复 sizhengliu 的帖子- y( G/ |( }: @

' T$ }- J" X1 S' B1 w8 f& l用DMEM/F12 1:1 配置胶原酶4的工作液，工作浓度是1mg/ml。 配置的量看你养细胞的数量了，可以配置30ml的工作液，分装为1ml，与-20℃保存，每次解冻一只使用，这样消化的效果好。