传代问题

owenlion

1. MSC的纯化靠2部分，一部分是前面所说的传代操作，MSC最先脱落，人为的先将MSC先消化下来，这在前面几代作用比较明显；二部分是靠，MSC的快速增殖能力，在后代当中MSC占的比例越来越大，当传了2代后MSC应该占90%以上。8 O7 g2 b% J* j% `4 s
2.MSC消化以细胞刚变圆为宜，你可以做实验，计时几分钟可以消化下来，通过你的优化来获得最佳时间，一般2min即可，

yxp

1. 许多国外文献都介绍过，与杂细胞相比，MSC对胰酶较为敏感，胰酶室温消化2～3分钟即能脱落，未脱落的为杂细胞，所以通过传代把不易消化的细胞弃掉就是一个纯化的过程
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4 N/ a& [& C* Z; O2. 依据我的经验，你原代要12天才能长满消化，说明你铺盘的时候，细胞密度过低，细胞在培养皿上长的时间过久，导致细胞老化不易消化，此时如通过机械吹打把细胞弄下来，细胞也不会呈现圆形而是梭形，此时的细胞状态已经很差了，不适宜于用于下一步的实验

amney1

感谢楼上各位前辈的回答。
. J* r$ i' _3 ~* v接种密度是太低了，调整了接种密度，大概7天就可以传代了。6 @/ n, Q! f8 O1 T1 w1 }2 B
加了EDTA后胰酶消化果然很快。  ^4 o2 K# O& x: Y
不过仍然有一些疑问：+ }7 _4 S3 C. R) ]
1.消化时间：室温下一分半钟细胞就有部分漂浮了，到两分钟终止消化，细胞传了代还是死了不少。大家一般消化多久？) j" X; z3 S, g. b0 C0 a" k8 D
2.师兄指出可能是因为我没有把含胰酶的培养基弃去造成培养基成分改变。这个会有影响吧？
* Y1 ^9 N1 I; c: N, L1 q3.消化比例：大概多少比例细胞能消化下来？特别是原代比例。我感觉是大部分都消化不下来。
) Q5 ]% G% h# @: O1 `* ?' y4.如何悬浮成单细胞。靠吹打？离心？; x9 v# K$ B9 R" F# U3 ^

4 [* F6 |! V* x2 P. k$ \# T. Q+ ~" k4 u& e8 n: x1 v1 f, C) J