如何保证原代细胞的无菌？

sarah19860420

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$ ]5 s  d$ ^: L1 o2 ~
( m" [* |$ q: Z9 h3 r2 F+ m这里用0.45um的滤器的作用应该是滤除chips以及一些较大的杂质，不能达到去除细菌的作用。如果想要去除细菌还是要用0.22um的才可以。不过如果用.22的滤器，估计你的样品估计要浪费很多了。感觉这样分离细胞，用滤器应该不是很好的选择吧。堵柱子，浪费样品和滤器。一般的操作还是在PBS以及培养液内加高浓度的抗生素，元代细胞，我一般用的都是5X的抗生素。不知道这样的回答对你有没有帮助，O(∩_∩)O~

sfk06

首先，操作要规范，其次获取的细胞用无菌的PBS洗涤一到两次。判断是否污染需要对其进行污染检测，肉眼是观察不出的，滤膜和滤器如何使用，要看你用的是何种型号，若是针管是滤器直接把滤膜加进去就可以了，不过不要拧太紧，灭菌后使用时再拧紧

amney1

Athon 发表于 2012-3-3 11:19
1 W3 U# R& N& K  F8 z5 cpbs加双抗反复冲洗解剖好的骨组织，大约十遍，27G的针管反复抽滤，再用0.45um的率器过滤，基本就可以做到无 ...

& ]$ e& I0 c1 M' h0 b还是有疑问，45μm的滤器过滤时能去掉细菌吗。干细胞一般多大，细菌多大呢。# {: k; `6 T" W; @; ?3 w
用滤器的时候感觉很难推动，是不是细胞堵住了滤器？6 Y( P  [: G( V
. c8 \1 X6 b4 I
PS,谢谢版主提醒

雁南飞

过滤除菌要用22um的滤膜才行。/ `/ ?, \$ V# ]& l' B  @
干细胞的无菌保证主要是无菌操作和器械的灭菌处理。
/ X* m) }+ a2 M建议老鼠处理后泡酒精5分钟再放入超净工作台处理，或者老鼠泡酒精后取股骨，然后股骨泡入酒精，双手消毒，烧杯外表面酒精擦拭消毒，转入工作台。
1 j6 c8 [1 {3 z$ W培养基可以加青链霉素。

caiwwcom

我这么跟你说吧：我这几次养骨髓干细胞都没有用双抗了，活的刚刚的  D, J' \; q7 n* W
记住几点，操作时保证周围环境无菌，可以在超净台上取，小鼠提前泡在百分之75的乙醇5分钟，骨髓去细胞时直接用pbs没问题，没必要加双抗，体内都是无菌环境，只要扒开毛皮，里面小心取出即可，次过程中 最重要的是环境以及所接触的瓶瓶罐罐 这些都是基本的操作了 所以这些只要熟练了 就不会大惊小怪了 其实是很简单的东西 避免染菌虽然不容易做到 但也不是想的那么难

金戈

回复 amney1 的帖子" J1 j5 ?$ J, S- E) d

" x2 k2 O2 s5 c  v8 g! u7 {过滤细菌一般要用0.22微米的滤器才能滤掉2 N# v4 a! K2 B: V
45微米是不行的2 ?9 t" _. L' y  I' |& t" v
通过过滤讲细胞除菌是不现实的。细胞远比细菌大。

金戈

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" H5 u! D- y$ O) S
6 g, C0 p! u. \- Y你做的是动物9 ^9 K# b$ n3 Q5 _
1. 先将整只动物消毒（浸泡酒精或碘伏）
6 G$ b0 Q" Y, _- u8 O2.注意细菌一般是在皮毛，如果开了腹腔的话小心肠道细菌。6 W& ]5 L! S7 s, S4 e
3. 如果在操净台外操做，你要注意器械的消毒，点个酒精灯也好。（其实没有点也没关系。）
- k2 C. P3 w- I8 ^+ @: y& }; F' w4. 将大鼠腿骨取下放入PBS中，移入超净台继续后续工作

lvmaoshiwo

过滤细菌一般用22微米的网吧？

levell

细胞过滤也不可能解决污染的问题啊，细胞可是比细菌大啊，
$ `' _* m, t' [( y! L6 l不知道你做的是什么动物的，尽量将动物消毒吧，原代培养的污染多半都是取材带来的