关于 使用流式细胞仪分选人类女性生殖干细胞

a2782953

8 Q3 e# ]$ g" F$ K: U
; T2 q, a. b0 O8 Y( u8 u1 e
回复 leisong12 的帖子: I4 R# T6 x1 r- Y# u/ F

; T& R( s' @4 B" N% _     对啊。。。我同样纠结于此啊！！！！我还在想我是不是关于流式的知识太少了，所以理解不了，问了好几个同学，都搞不清楚这是怎么回事。握个手先！至少知道不是我一个人被作者弄晕了。。呵呵   谢谢这位朋友了！ 不过作者说图中 那个Anti-rabit-APC  是用来排除自发荧光的，不知道改如何理解。。

cneagle66

: q+ `1 v: I* T- a

" x/ D2 R9 o& }% x7 x1 d0 I/ B! `对于这3张图，发表些自己的看法。* Z0 y3 V3 w9 h( @5 C# x
对于活细胞，从染色看，第一张只加COOH端抗体-APC，所以按照文字，应该是细胞在APC纵轴上移，（而后作者说是印刷错了，真的么？）中间张图，只加NH2端抗体，488几乎无细胞染色，所以从前两张图上看，应该是COOH端可以在胞膜上检测出来，而用NH2端抗体检测不到阳性细胞。所以，我觉得作者给你回信说是印刷错误，也不好解释这两张图。
0 O8 M+ W3 ~. k( d, M第三张纯粹是穿孔染色的对照。& k4 s) K! e' ^- E+ V
他用这两个颜色染色，就用他们做纵横轴，我觉得没有什么问题。
# h- Y' P; R) Q  _: S( j* N阴性区域为什么那么小，我想应该是用无染色的对照划定的区域，不影响结果判断。
; c. t7 S) M  f8 i; K  H
2 ?" I0 W2 D8 ?" u$ c5 q% ~结论，图的确有问题，怎么解释只有作者知道，暂时相信他的结论吧，自己重复实验以后才知道。  N0 {% R* T: i. f. H( R
, R$ U/ k1 s$ `
另外，若有新的发现，还请来这里告诉大家一声，一起进步啊！

leisong12

"那个Anti-rabit-APC  是用来排除自发荧光的，不知道改如何理解"       这个也有可能，我没有调查过该细胞自发荧光光谱范围，但是可以单看APC标记，发射波长660nm, 个人认为动物细胞自发荧光不会达到该值，所以用APC标记的抗体检测不会与自发荧光重叠。Alexa Fluor488发射波长519，PE是575，很可能与细胞自发荧光发生重叠。但是实验都是会设置对照的，应该没有这个问题啊，真不知道作者想说什么？

chenchunlei

我这周就讲这篇文章，对于这个抗体分选的OSCs图也看不懂，本人觉得figure1中的C图COOH分选的阳性细胞应该在阴性细胞的左上方