今天丝裂霉素处理MEF出现了问题，谁能告诉我啊

frankieisme

1 u5 V/ G, J5 l5 c; d4 I

# G- k) ]  Y0 l. a0 EPBS洗3次,加胰酶消化,镜下观察大细胞间隙出现,细胞稍稍变圆就终止消化,计数种板.为什么不按标准的protocol做,一般情况下还是不需要随意更改protocol.

zhusealin

我们也是处理完洗5遍，细胞也挺正常的。主要应该还是消化的问题

huangcong1988

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% G* d' u9 P5 i! \( R# `" J: l: h1 C, p) o2 z
1.5ml
3 G' M0 V* B! H  P9 w7 m5 ^' g- P胰酶？1.5ml是不是多了点？个人觉得你量的三分之一就够了，胰酶哪有用那么多的啊？

huangcong1988

我试过用洗两次，就洗两次，效果也行，不过洗5次可能还是多了点

receiver1

MMC处理的时间是合适的，PBS洗几遍都没多大问题。问题肯定出在你的胰酶消化这一步上！

myrudy

回复 momocy 的帖子+ f* c' ]' {( a6 Z% R% {

! d- Z  |2 w, E洗一遍的话，丝裂霉素的残留量会较多，对细胞伤害较大。

YYQ6301

丝裂霉素的浓度没有弄错吧？应该是消化过度了

shangchunhua

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PBS是预热的吗？

chenchunlei

操作版本怎么这么多啊

前途似锦

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这。。。。。。。。不要误导小朋友啊，呵呵