神经干细胞贴壁

shxwang

我的神经球培养至第四天未贴壁（此时只是有一两个神经球贴壁)，但是到了第五天大部分都贴壁了，贴壁之后虽然有一些分化，但是跟药物诱导的不一样，求解答？

cochongg

简单来说：神经球不是单克隆团来的，而是细胞聚集形成的集落，所以你传代的时候要注意密度，细胞在得不到它们所需的密度生长时，也就是细胞间的信号传导受到阻碍，就会启动某些路径，从而发生凋亡，分化等等' _, t" ?' `) b
其次就是培养液，该添加的都加了吗，培养基成分很重要。

细胞海洋

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建议上图

shxwang

图片貌似上不去。。。能不能请版主帮我吧上一条回复删除，因为图片传的方式不对。。。
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细胞海洋

回复 shxwang 的帖子
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, b. R+ Y* t: q. r/ d& H回复 高级模式 附件上传 单个图片不要大于1000kb

shxwang

shxwang

谢谢版主，照片传上来了。这是球贴壁2天之后的照片，不知道为什么球突然就贴壁了。

shxwang

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  _) w/ \4 q2 U' l( Z, X" Y' k0 `9 e) W! s9 _( s" N$ G' z
请问下，如果我的基础培养基（DMEM/F12）预热过久(有时候会过夜）会不会使其失效呢？

cochongg

回复 shxwang 的帖子) B8 q' f9 \! R/ K4 B2 P
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最好不要这样，培养基中有血清，血清中有很多蛋白成分，虽然37摄氏度，预热不至于让他们热变性，但是长时间置于37℃会使培养基中的成分降解的，蛋白降解成小片段的多肽，氨基酸等，这样会影响培养基的渗透压，其次一些添加物，如L谷氨酰胺，也会降解，同时产生氨，你应该了解，氨不仅应先培养基的pH，同时在一定浓度下对细胞有毒害作用。
$ u6 S, L9 W2 e! f& H1 O" n! W（当然很多时候，我们的一些小错误并没有像上面说的那样可怕，但是这是我们应该做到的，而且对我们实验有利的）
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& k- O2 g. e% R) v( X: D+ Q! [* T: M所以培养基用完就密封4℃，保存。; _' w8 c& }% T: ]6 ^6 R
一般配好的完全培养基不适合长期存放，两周内用完适宜。

shxwang

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3 E! \  k/ {) R& z; l2 U; B谢谢~~