错在哪一步，望赐教！-------谈脐血分离EPC

542177563

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) x1 _# e0 ]3 t6 y! M7 d/ V( U* p# g先谢了！

zz091115

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  n6 y6 G; {$ t; `' s( ?纤连蛋白还是别省了 我没做过对比 但是貌似有不小影响 小鼠骨髓效果是不太好 我之前也碰到过 还有和你小鼠有关 老鼠周龄短自然才好做

542177563

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2 E$ u9 k" S4 |7 y. S! V. t, d4 y3 x% R  p2 r1 l1 B" b6 g
看到你培养出的EPC克隆团图片很漂亮，请问是用成人外周血分离+fibronectin涂层培养出来的吗？培养几天得到的？

almasun97184

脐血不能先用红细胞裂解液再密度梯度离心。你做的这一步是为了什么啊？Ficoll的说明书也不是这么写的啊。直接稀释了离心就行。
+ J1 R, _% P# s7 @0 f! d# N脐血稀释倍数和血液Ficoll的比例不是特别重要，有点出入关系不大。1：1到1：2都可以。% j( ]- c( r: z6 W( a
离心时的加速度确实非常重要。必须为0。移动的时候也要很注意。
! T+ y* O$ D" C3 N/ |8 y) _FN还是铺了好，影响不小。没有FN，出来的克隆又少又小。

realinter

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: G, K7 K* i- D! J: o+ Y同求步骤啊scylc@163.com& v1 D3 Z& k0 p$ C( \+ U9 t2 ]: M, ]
另外，EGM-2培养基怎么使用啊，给了很多补充试剂包括EGF,FGF,VEGF ，vc，FBS什么的，是全部加进去吗，还有FBS在 kit里面只有10ml ，要另外补加到10%吗，谢谢

quit6927

542177563 发表于 2012-5-11 21:37 4 C! ^' Y% Y+ I% _: {. u) s1 t# O* R
具体步骤是：脐血稀释---红细胞裂解液裂解稀释后的脐血---取上清液-----再用密度梯度离心----吸取白膜层（白 ...

) q7 c( F3 Q! e* o* U& C7 N铺板是必须的。不知道红细胞裂解液处理会不会影响MNC活性，我们直接生理盐水稀释然后就ficoll离心。我们的经验，脐血的分离效率也是很低的，几十ml也就1、2个克隆。

evial

你太有才了，将红细胞裂解法和梯度离心法合二为一！本来外周血EPC就很少啊！洗来洗去的说不定就洗没有了，哈哈

coffee.cat105

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  i  u) q( W- U. G& j- B9 ~( J  P. s  l$ b% m& n
能发一份给我不？我们正要开始做，想要一份详细步骤，万分感谢，

PercyLaw

另外，密度梯度离心Ficoll液：血液的比值是在离心管中高度的比，尽量两段都长一点，加血液的时候一定要慢，离心力宜小不宜大，时间长短可以自己摸索一下。而且有的朋友说，Ficoll液的厂家和质量也决定了白膜层的清晰度和分层情况。
6 M/ d1 Z; t5 q我个人感觉还真是不需要红细胞裂解的，直接在ficoll液中加稀释的血液应该就可以。

PercyLaw

个人认为，EPC这种细胞还是比较少而且娇气的，所以洗细胞可以试试用培液（不加血请的，最普通的那种，1640也可以），对细胞的损伤会比较小。