我做了一个重组质粒转到DH5a中，想长期保存菌种在-80，可否不用程序降温盒，直接放？ - 实验室综合讨论区干细胞之家



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楼主: 紫竹驭风	go [请教] 我做了一个重组质粒转到DH5a中，想长期保存菌种在-80，可否不用程序降温盒，直接放？ [复制链接]

langziforever

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11楼

发表于 2012-5-27 22:35 |只看该作者

当然直接放了，我们加200ul 80%甘油+800ul新鲜对数生长期菌液，冻存过几千管，都没有接不活的！

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sylar.wy

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12楼

发表于 2012-5-28 01:07 |只看该作者

dh5a放-20就可以了吧…如果真要长期可以-80，直接放就可以…

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flashlab

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13楼

发表于 2012-5-28 01:45 |只看该作者

速冻没有问题的，重组菌最好涂板传代几次后再保藏

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keren4808

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14楼

发表于 2012-6-9 17:59 |只看该作者

50%的无菌甘油然后和对数生长期菌液1:1混匀冻存即可。当然—80保存时间更长，实验室有冻存3年以上的还是可以孵出来的

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youzi821

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15楼

发表于 2012-6-26 10:05 |只看该作者

可以直接放，我以前都是这样存的. {, C0 t" V0 z/ @; [4 M$ D% g3 q

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风雪叶杰

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16楼

发表于 2012-6-26 16:34 |只看该作者

一般直接加15%终浓度的甘油可以保存一年左右。DMSO也可以啊，干嘛需要程序降温啊，我都是直接放的。

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pailishi

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17楼

发表于 2012-6-27 08:36 |只看该作者

甘油终浓度30%，-80冻存没问题，我冻存了9年的菌拿出来也一样能复苏使用！

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wcfeng88

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18楼

发表于 2012-6-27 08:59 |只看该作者

可以同时做两种保存方案：1.直接保存质粒DNA。DNA水溶液直接在﹣80℃中长期保存不降解；或先把DNA沉淀下来后保存在70%的乙醇溶液中，在﹣80℃中长期保存不降解。DNA量大的话以后可以直接拿出来使用，或者把它转到DH5a中大量扩增。2.含有目标质粒的DH5a，在20%-50%的甘油中均可以直接在﹣80℃中长期保存，用的时候直接拿出复苏就可以了，一般不建议程序降温。两种方案同时用上，可确保万无一失。