求救最近两次培养原代大鼠骨髓间充质干细胞，但是细胞都不贴壁

皮搋子

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最近两次培养原代大鼠骨髓间充质干细胞，但是细胞都不贴壁，用的培养基和血清都是和以前一样，操作也一样，为什么现在就不贴壁了呢？

doctor8848

想想你是否完全用的同样protocol，再有注意下你用的培养皿，材质，尺寸，coat方式，这些对MSC贴壁生长会有影响，一般贴壁细胞6-24小时就充分贴壁了，如果原代贴壁不良可在第一次接种细胞时，允许范围内适量减少培养液，以减少浮力，有助于细胞贴壁

ffkkk2007

回复 doctor8848 的帖子0 t( \/ j; N: N1 k0 z, ~% J

/ i, Z$ y7 k3 I$ t" U. U* Z' E说的很有道理，学习了

皮搋子

谢谢指导

cavalior

我也是哎，都做了不下十次了，1个月以前同样的培养基、同样的操作方法，原代还是很好养的啊。楼主你的问题解决了么？

hhxxattxs123

回复 cavalior 的帖子* }# I  M1 t% g( a( I" q

, \; L) T! e& k" J# a* r1 E0 t1 H( o培养液对细胞生长很重要，你说一个月前还贴壁，现在不贴壁，我感觉是2种原因引起的，一个是你的培养液时间长了，偏碱了，另外是你选择的大鼠最好是4周龄较大的那种，我一直做，全部都贴壁，基本上没有不贴壁的情况，我用的是澳洲血清，GIBCO的，还有GIBCO的培养液，自己配制的不容易偏酸或者偏碱，细胞原代24小时贴壁非常多，3天后培养瓶就长满了，你可以换下培养液试试

hhxxattxs123

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+ u+ p% R0 X9 z6 X8 z. ]楼主，你用什么方法培养的？我选择的是全骨髓贴壁的方法，简单实用，24小时贴壁很多的，取的方法和培养液对细胞的生长和贴壁很重要，最近细胞长的特别快，几天就满了，我觉得你们可以试试

星火燎原

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8 p' R8 K" W# o' ^* b4 }; p9 e谢谢分享，我的细胞贴壁杂细胞很多是怎么回事，谢谢

细胞海洋

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建议你发新帖提问 并详细说明你的情况 最好上图

皮搋子

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现在已经解决了，细胞长的很好