弱弱的问下大家养mES时用的N2B27和DMEM/F12都是哪个公司的~

不倒翁

media是gibco的7 r0 ~1 m/ |. l0 I) p. p

genedu

回复 vegetax4132 的帖子  f" I9 W! z% ^7 N6 J

) `. T$ m3 Z8 }( C+ o, d  ^) X3 W是serum-free体系，DMEM/F12，cat.NO:12660-012 (GIBCO)

vegetax4132

回复 genedu 的帖子; d6 v6 a9 G5 H3 G+ Q

+ o' V4 Y) I, g; x( a啊？  serum-free，  那是还有feeder吗？

genedu

回复 vegetax4132 的帖子5 _8 V& R: j6 _( o/ ^. R
+ A5 c  @) U) i4 v: x% K
用feeder，就是应启龙的RAT ES培养体系，小分子用量可以参考其关于ground state理论的那篇文章

vegetax4132

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; }3 {! V$ N; S4 U, @$ E6 E4 F- v5 Y6 W' _, W* y1 P1 }$ G
谢谢  那能详细说一下 培养基的各种成分吗？$ d7 F6 [+ Z/ P
我现在用的是：) x3 w4 ?, |5 b# I7 Y5 S' G
15%FBS+DMEM+NEAA+GlutaMax+双抗+BME+LIF   有feeder# g3 M. M5 }  o0 q4 g& Q" _
总感觉养的形态不是很好，所以想换成无血清的

genedu

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# S. k1 s5 @2 w& z' c6 f0 @+ q' Z6 j% h# `  I
您的15%FBS+DMEM+NEAA+GlutaMax+双抗+BME+LIF   有feeder，体系基本是小鼠的ES培养体系，但是FBS是和PD0325901有拮抗作用的，所以说这套系统不是很合适，我用的是NEUROBASAL Medium+DMEM-F12 medium+N2+B27+LIF+bme+双抗，你试试

wawj

回复 vegetax4132 的帖子' n+ R! T9 c: _4 }; t$ ^

" l7 m" E& T# d" j2 Z* K" ]怎么用ＦＢＳ养呢？这样容易分化啊！我用的是ＤＭＥＭ＋１５％　ｋｏ　ｓｅｒｕｍ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ，还要添加NEAA，L-glu,B-巯基丙醇。用时再添加LIF。还想请教下无饲养层培养是怎么个配方？

vegetax4132

回复 genedu 的帖子0 H7 V1 W7 |; s& Y# m+ ^
5 ~- D2 F  N* M1 ~# b4 c/ D  @& L
真是太感谢您了，FBS 和 PD0325901 有拮抗作用我以前还真不知道啊，有人专门做个这个吗？3 O; w) |% B9 m5 [* h
那我试试您的体系， 假如我要配200ml的培液的话， 是用9 L! G5 [0 D  ~/ G1 x- A4 E. S
98ml的NEUROBASAL ! m8 L0 m& L$ ?" D( s
99ml的KnockOut DMEM   cat.NO:12660-012 (GIBCO)- V3 K* ]% g! W6 q9 R! p% U
1ml 的N2          17502-048$ H' D. J% l4 H+ }; C" [
2ml B-27           17504-044* b! f2 a  z1 g: |3 t
+LIF
/ O- V- _6 r" B% {# {; ^, F2 j7 T+bme$ C+ v2 X# g/ X0 U/ _4 `
+PS7 v3 G$ ?' n5 g! A* O
吗？
' {, I7 ~  T- u7 S( I

zpzp0312

不必什么都尝试
3 D9 ]# x; z+ b$ G( j1 ^5 C如果是饲养层饲养
: E+ c) C* ~+ G用gibco的DMEM就没问题

genedu

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3 ~8 \: h! @) `* ^8 |: c$ G; j2 x& y
+ l' q$ G7 v2 q, u' t0 j7 U没有这么严格啦，按照在美国的实验室，就是把小瓶的N2和B27加入大瓶的NEUROBASAL和DMEM-F12就行，正好是1L体系，N2和B27一个是5ml包装，一个是10ml包装，最好不要反复的冻融，那样会影响效果。另外N2B27的包装一般情况下都是有多余的（大于5ml和10ml)所以说，配1L体系比较好