trizol提取

luoziwei

回复 yaolinzhang 的帖子" _: s8 L/ c8 t7 ?: k

; C7 e. c5 z, x7 J我也用等体积的，沉淀了之后，还用75%的酒精洗了一遍，咋还有230nm的吸收峰呢？

luoziwei

回复 chentian820 的帖子8 R  n& N/ A6 ^3 r

7 x0 W( g$ M4 ]3 h请问，加醋酸铵的作用是什么？可不可以加冰醋酸和氨水一起？

avbn

大家方法都挺多的吗，不过有人做过验证吗，有没有差别呢

huangcong1988

个人觉得楼主没必要纠结这个问题，用异丙醇是trizol提取RNA的关键步骤，沉淀RNA用异丙醇就行，干嘛要换成无水乙醇呢？

ielisa

使用异丙醇的话是等体积异丙醇，室温下10min即可，如果你想用乙醇的话，要2倍体积，最好-20℃，30min

linzi214

用异丙醇沉淀不是标准的RNA沉淀方法吗？实验室如果暂时没有的话，可以找别人借一点好了，样本珍贵以前有没有做过预实验的话，尽量不要更换其他试剂和方法了

weiyepan

有机溶剂沉淀都是用脱水的原理处理核酸使其沉淀，异丙醇的脱水效果比乙醇要好，对小分子的RNA来说更加是这样。9 K/ ~/ W0 s( d" D2 ?4 @
不知道楼主提的总RNA还是小分子RNA。如果总RNA的话用乙醇可以，但乙醇比例至少要到66%以上；如果提的是小分子RNA，建议就不要用乙醇了，回收效果不好。& j. l- _- t$ V7 |4 I$ c
另外回应一下沉淀的时候加盐的原理，为的是形成核酸的盐沉淀，光是核酸的话很难沉下来的，除非是在等电点附近。加不同的盐有不同的效果，铵离子不能随便加的，对很多后续反应都有抑制作用，和染料更是容易形成复合物改变波长，因此一般都是加钠盐和钾盐。