培养脂肪干细胞一定要用无血清培养基吗？

sunflower636

各位前辈大家好。小生刚接触脂肪干细胞。从五月底开始分离，培养脂肪干细胞。我用的GIBCO的Stempro MSC SFM ，包括500ml的基础培养基和5ml的添加因子，但是到现在还是没有做出来。这个培养基是不含血清的，因为当时咨询了实验室的老师说干细胞要用无血清的培养基，我看到文献里大多是DMEM:F12培养基，我想问的是我的细胞没有样出来是不是培养基的问题啊？我是不是应该换培养基？？恳请各位前辈指导啊，俩月啥都没有做出来很是郁闷啊

wangshumin12311

ADSC不一定要无血清培养基培养，无血清培养的目的只是适合将来临床使用或者排除其他不确定成分因子影响基础研究的判断。你可以用含10%FBSDMEM:F12培养基培养好原代（0.1%gelatin包被，I型胶原酶至少消化40min以上），然后使用Sciencell的MSCM进行培养，效果还不错

yangwy028

你往培养瓶里养细胞的时候那细胞是活的吗？可以先观察一下

pailishi

用DMEM:F12再加10%FBS吧，再加点生长因子，肯定就没问题了

sunflower636

回复 wangshumin12311 的帖子/ N+ Z+ y% U4 ^5 |

7 M' X4 W% {# ?谢谢前辈详细的指导，你们用的 DMEM:F12是哪种规格的呢？是GBICO的吗？我与厂家沟通他们有好多中配法。最后我选的 是含GLUMAX 不含HEPES的那种。因为我查阅文献上用的是这种，但是不知道这些大同小异的配方对细胞生长到底有没有影响啊？

sunflower636

回复 yangwy028 的帖子
# V% A4 K9 K4 X2 X
/ T$ }' W5 e3 ~这个倒是没有注意。做原代分离，重悬后会看到好多种的细胞，也有好多细胞碎片的成分，我还用了100目的滤网过滤过的，不知道为什么还是有那么多其他成分。

sunflower636

回复 pailishi 的帖子
2 n7 O- w0 C7 f- D# G+ P) T. s
" h- ^- n+ u  r& m5 d9 u. z敢问前辈用的试剂分别是什么厂家的啊？我觉得这个不同厂商产的会对试验结果有不同影响吧？
5 N3 l% q' H7 c1 d* |7 u; G

yangwy028

回复 sunflower636 的帖子
  ~2 U1 T) u; K( p  m
4 L5 A6 p* o6 C其他成分倒是没什么大的影响的，换液就好了，关键是一开始就没有活细胞的话，再怎么样也没戏啊

wangshumin12311

回复 sunflower636 的帖子) d2 i; g/ l3 r

" J6 z# s; e2 }. Z& d  K我之前一直没用DMEM:F12基础培养基养ADSC用的是DMEM高糖，养好贴壁后换Sciencell的MSMC专用培养基（含FBS）培养，DMEM高糖10%血清一直养着细胞容易衰老分化（含不含hepes问题不大---含hepes损失毒性大些，不含hepes毒性小但NaHCO3缓冲能力差，不过影响都不大，gelatin包被效果好于matrigel，如果有I/IV型胶原包被更好），等你养好了也可以换无血清的培养基。

相宜

没有提取出来不一定会是培养基的问题，很多的步骤操作不当都会出现的。就培养基而言，F12就OK了。我们是加的10%FBS，有一段时间我换成高糖的DMEM，依然没有问题。关键要注意好提取的分离，胶原酶的消化，离心的速率这些问题我觉得才是重点。