骨髓间充质干细胞相关问题讨论

wcforever126

小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养，看了一些资料，分享一下
1 f' G5 ^" d6 T% I1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs，故接种密度一般要在10的6次方；: C+ J4 H; }; B
2、MSCs三天后明显看到贴壁，48小时有贴壁，7天可看到很多梭形细胞；
. K' `" F% R0 E4 a- c3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失，所以要记得2周用不完要添加
* `# L- d5 \$ x/ ~' S* {4、血清一定要分装，不能一整瓶今天化了，明天再冻；
' P( N& ^2 Y4 q) ]9 O/ }5、配好的培养基一定两周内用完，2-8度保存。3 {! N7 _) z# t- E5 m/ V. G3 i
各位高手给些意见，及你实验过程中注意事项。

wcforever126

人气不高啊，看完整个帖子，基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的，故发此贴。

wcforever126

小弟刚开始做，可能好多写的东西不对，望各位前辈指证。
0 j  |" K) E/ ^3 S首先从分离细胞说起吧，4 V' d4 }. [6 t, f" B
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞，主要步骤如下，8 \) a( k8 r& K! K7 |  p
1、骨刺5ml病人骨髓液，等比例PBS混匀；# E- O$ }/ \5 D
2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2，一定要小心
# R0 x/ x2 H) y; S, c3、800g。20分钟，20度9 c! J8 |; E! A% S9 g
4、白膜层，稀释3倍体积的F-P体积
/ h8 t1 ~/ p7 [. `6 c5、300g,10分钟，4度，重复一次
. J4 R: ~, n; T1 U+ b( F6、接种密度5*10的6次方。

wcforever126

今天说下无菌观念吧
7 u  R, A+ P; r( s1、进实验室要换鞋，洗手，尽管您要戴手套也要洗手，穿工作衣，最好穿长裤到脚跟；! ^6 u* Z0 F( H/ h7 g1 Z# d
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒，这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温，30-60分钟后基本上恢复室温，不用再在水浴锅里预热，防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。; l6 e* r( W+ }" L. y- o* I
3、酒精消毒超净台面，外拿进来的物品酒精喷洒消毒，至于是否点酒精灯的问题，保留个人意见。9 |5 U8 V1 E+ t4 m: @- ?5 s- z
4、操作过程中，不要混用枪头，最好自己的枪头前一天消毒，实验室人多混杂，注意保护。

wcforever126

关于接种密度问题1 P+ G3 Y( K; b2 s2 G
1、如果你用了细胞因子之类的，可以10的5次方/ml接种! \8 T9 B* J" w7 ?! ?% B9 [& {" W! m
2、如果没加细胞因子，可以10的6次方接种。

ffkkk2007

楼主精神可嘉，我也说一个：间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶，比用玻璃培养瓶的效果好很多

wcforever126

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8 T8 ~3 q, V: U3 g
% t4 J% P/ J9 c* d- G  y有利于贴壁，最好用进口的。

firstaider

从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好，当然必须是自体的，通过体外扩增的，目前体外扩增的技术都不怎么好，希望有人有更好的建议

lindanmiaoyao

你们都是做人的BM-MSC吗？有没有做猴子的？

细胞海洋

回复 lindanmiaoyao 的帖子2 I$ Q- Y0 C+ o, u6 |+ q

) o8 ~8 H% w+ X  w3 o2 o/ H, Z. @建议你发新帖提问