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骨髓间充质干细胞相关问题讨论

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包包
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发表于 2012-8-8 10:05 |显示全部帖子
小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养,看了一些资料,分享一下
8 p! P9 m3 R% ?3 R, ]1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少,大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs,故接种密度一般要在10的6次方;8 Y" ]# e; x* B% ]( T8 W
2、MSCs三天后明显看到贴壁,48小时有贴壁,7天可看到很多梭形细胞;
1 j/ u5 h. A9 N; h4 y3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失,所以要记得2周用不完要添加7 B) n$ x7 u5 o# \3 A8 D
4、血清一定要分装,不能一整瓶今天化了,明天再冻;
2 d9 ^1 y) F* M. [1 W5、配好的培养基一定两周内用完,2-8度保存。
  g5 R. e  f/ Q3 r各位高手给些意见,及你实验过程中注意事项。
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发表于 2012-8-8 21:23 |显示全部帖子
人气不高啊,看完整个帖子,基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的,故发此贴。

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发表于 2012-8-8 21:30 |显示全部帖子
希瑞干细胞
小弟刚开始做,可能好多写的东西不对,望各位前辈指证。
% Z3 G2 }& Y! C2 g' g+ k, d, N首先从分离细胞说起吧,
- K$ M7 i5 D9 s5 \+ ]我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞,主要步骤如下,
3 e- [6 M- }: s3 j) A4 ]- n1、骨刺5ml病人骨髓液,等比例PBS混匀;% `, X6 l* m3 i
2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2,一定要小心* Q) D( U7 f' M: R! F+ B
3、800g。20分钟,20度3 V: z/ A+ S9 P2 [% w' K$ |
4、白膜层,稀释3倍体积的F-P体积
4 x2 M) x5 E  m( j5、300g,10分钟,4度,重复一次
+ g+ k5 B' S. U$ E6、接种密度5*10的6次方。
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发表于 2012-8-9 09:58 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
今天说下无菌观念吧) `5 u% G6 t+ q; ?  I
1、进实验室要换鞋,洗手,尽管您要戴手套也要洗手,穿工作衣,最好穿长裤到脚跟;% b+ H2 G" H4 h9 ~; M" S
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒,这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温,30-60分钟后基本上恢复室温,不用再在水浴锅里预热,防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
6 S' A( s& ]+ m  F7 B3、酒精消毒超净台面,外拿进来的物品酒精喷洒消毒,至于是否点酒精灯的问题,保留个人意见。0 L/ _& {: h) @/ s* o; k! T
4、操作过程中,不要混用枪头,最好自己的枪头前一天消毒,实验室人多混杂,注意保护。
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发表于 2012-8-11 19:22 |显示全部帖子
关于接种密度问题5 [' k3 K1 N1 X6 c. L
1、如果你用了细胞因子之类的,可以10的5次方/ml接种
% E1 E% M% L! w' y4 C7 x* Y: L2、如果没加细胞因子,可以10的6次方接种。
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发表于 2012-8-13 08:17 |显示全部帖子
楼主精神可嘉,我也说一个:间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶,比用玻璃培养瓶的效果好很多
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发表于 2012-8-13 09:05 |显示全部帖子
回复 ffkkk2007 的帖子
: e( j8 e6 U* ]4 c$ b) }6 V- c* B8 K7 I' u8 O$ [% H/ p0 Y& N
有利于贴壁,最好用进口的。
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发表于 2012-9-28 00:04 |显示全部帖子
从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好,当然必须是自体的,通过体外扩增的,目前体外扩增的技术都不怎么好,希望有人有更好的建议
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发表于 2013-5-17 11:36 |显示全部帖子
你们都是做人的BM-MSC吗?有没有做猴子的?

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小小研究员

发表于 2013-5-22 10:11 |显示全部帖子
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