干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
朗日生物希瑞干细胞
查看: 16836|回复: 11
go

骨髓间充质干细胞相关问题讨论

Rank: 2

积分
99 
威望
99  
包包
129  
发表于 2012-8-8 10:05 |显示全部帖子
小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养,看了一些资料,分享一下+ K4 O  x% e, v- \# Y& _; p& V" J1 Y
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少,大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs,故接种密度一般要在10的6次方;- e4 ]4 A- U( U7 P7 w% ^
2、MSCs三天后明显看到贴壁,48小时有贴壁,7天可看到很多梭形细胞;: a" r- s! `8 g/ l
3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失,所以要记得2周用不完要添加2 ~# m8 W* M) ^* m) j/ z
4、血清一定要分装,不能一整瓶今天化了,明天再冻;
8 E$ }3 q# b( M4 a4 f! v4 [5、配好的培养基一定两周内用完,2-8度保存。
3 i% Z3 u$ J' g& H* t, h% e各位高手给些意见,及你实验过程中注意事项。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
99 
威望
99  
包包
129  
发表于 2012-8-8 21:23 |显示全部帖子
人气不高啊,看完整个帖子,基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的,故发此贴。

Rank: 2

积分
99 
威望
99  
包包
129  
发表于 2012-8-8 21:30 |显示全部帖子
希瑞干细胞
小弟刚开始做,可能好多写的东西不对,望各位前辈指证。  v) a0 M  A3 l3 L
首先从分离细胞说起吧,0 E2 y9 T& u) n0 R6 d2 w6 m, b# [
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞,主要步骤如下,7 L/ `  K/ [+ M7 a# `0 I$ c
1、骨刺5ml病人骨髓液,等比例PBS混匀;6 V5 \7 ?6 h" `+ L
2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2,一定要小心
0 w; u& U2 H: E3、800g。20分钟,20度
& N4 k3 G. j3 {4、白膜层,稀释3倍体积的F-P体积
# c" X: M9 x( W% O9 x3 e- J, y2 U! T: H5、300g,10分钟,4度,重复一次- m7 w: n# E& i; q0 }5 c# L
6、接种密度5*10的6次方。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
99 
威望
99  
包包
129  
发表于 2012-8-9 09:58 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
今天说下无菌观念吧
3 A$ }) I+ @5 o8 g$ ^: s- _1、进实验室要换鞋,洗手,尽管您要戴手套也要洗手,穿工作衣,最好穿长裤到脚跟;4 k* J( u9 ~. N! @
2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒,这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温,30-60分钟后基本上恢复室温,不用再在水浴锅里预热,防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。
+ c3 R+ @- i' {2 b" h0 b! i8 z3、酒精消毒超净台面,外拿进来的物品酒精喷洒消毒,至于是否点酒精灯的问题,保留个人意见。7 E( P( K5 {! a5 E5 Y
4、操作过程中,不要混用枪头,最好自己的枪头前一天消毒,实验室人多混杂,注意保护。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
99 
威望
99  
包包
129  
发表于 2012-8-11 19:22 |显示全部帖子
关于接种密度问题
* f! o" J( Y$ l1、如果你用了细胞因子之类的,可以10的5次方/ml接种
- {3 y$ |* ]2 x" t: k  ?2、如果没加细胞因子,可以10的6次方接种。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 5 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
18 
威望
18  
包包
223  
发表于 2012-8-13 08:17 |显示全部帖子
楼主精神可嘉,我也说一个:间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶,比用玻璃培养瓶的效果好很多
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
99 
威望
99  
包包
129  
发表于 2012-8-13 09:05 |显示全部帖子
回复 ffkkk2007 的帖子
5 u  {$ W7 p- K/ z+ U. S  }6 J* F4 N, X& o$ T
有利于贴壁,最好用进口的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
255 
威望
255  
包包
512  

优秀会员

发表于 2012-9-28 00:04 |显示全部帖子
从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好,当然必须是自体的,通过体外扩增的,目前体外扩增的技术都不怎么好,希望有人有更好的建议
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 1

积分
17 
威望
17  
包包
121  
发表于 2013-5-17 11:36 |显示全部帖子
你们都是做人的BM-MSC吗?有没有做猴子的?

Rank: 8Rank: 8

积分
308 
威望
308  
包包
3629  

小小研究员

发表于 2013-5-22 10:11 |显示全部帖子
回复 lindanmiaoyao 的帖子
0 E! C9 ?+ a" _/ I# d" H" Z. B& f( w5 s" [9 Y3 E3 P
建议你发新帖提问
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备13001605号 )

GMT+8, 2019-6-27 17:20

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.