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骨髓间充质干细胞相关问题讨论

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包包
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发表于 2012-8-8 10:05 |显示全部帖子
小弟最近再做病人骨髓间充质干细胞培养,看了一些资料,分享一下) z1 L  y8 r+ V2 H
1、骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少,大概10的6次方骨髓单个核细胞中仅含有2-5个MSCs,故接种密度一般要在10的6次方;" }8 g$ d( r+ Q) a3 e) q
2、MSCs三天后明显看到贴壁,48小时有贴壁,7天可看到很多梭形细胞;
; z0 K! _' x% Y) k" I3、液体培养基中的L-谷氨酰胺在你打开培养瓶盖时候大概2周会代谢消失,所以要记得2周用不完要添加; h$ q1 u' {  `4 I' w2 W
4、血清一定要分装,不能一整瓶今天化了,明天再冻;
8 V$ h. Z5 N+ ?5、配好的培养基一定两周内用完,2-8度保存。
7 s# t+ R- N$ p% B+ g/ u) R各位高手给些意见,及你实验过程中注意事项。
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发表于 2012-8-8 21:23 |显示全部帖子
人气不高啊,看完整个帖子,基本没发现关于人骨髓间充质干细胞方面的,故发此贴。

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发表于 2012-8-8 21:30 |显示全部帖子
希瑞干细胞
小弟刚开始做,可能好多写的东西不对,望各位前辈指证。4 [4 d2 v- I# J) w( e
首先从分离细胞说起吧,  l0 m* k) Z9 d9 M8 `5 P
我们实验室主要用F-P 1.077分离骨髓间充质干细胞,主要步骤如下,+ a4 O9 @8 W0 A
1、骨刺5ml病人骨髓液,等比例PBS混匀;
1 G; c$ g3 N; M+ M1 N: B( s" A2、F-P比稀释后骨髓液1:1或1:2,一定要小心% u+ J* I8 u+ c7 H
3、800g。20分钟,20度. F6 x$ i& \% S
4、白膜层,稀释3倍体积的F-P体积% N- U/ l: Y; ?% d& Y0 o
5、300g,10分钟,4度,重复一次! D' h+ N! ^9 j+ x7 y
6、接种密度5*10的6次方。
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发表于 2012-8-9 09:58 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
今天说下无菌观念吧* e6 d9 g1 |8 L9 n; Z! U  U) F
1、进实验室要换鞋,洗手,尽管您要戴手套也要洗手,穿工作衣,最好穿长裤到脚跟;
& T4 V8 _- @* C. w2、打开超净台紫外灯30-60分钟消毒,这段时间可以把分离液及培养基从4度冰箱拿出放置室温,30-60分钟后基本上恢复室温,不用再在水浴锅里预热,防止不必要的污染。通风10分钟即可开始实验。& c. u" H- U' j8 C; m: T5 j
3、酒精消毒超净台面,外拿进来的物品酒精喷洒消毒,至于是否点酒精灯的问题,保留个人意见。
, i6 i1 o, g) h4、操作过程中,不要混用枪头,最好自己的枪头前一天消毒,实验室人多混杂,注意保护。
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发表于 2012-8-11 19:22 |显示全部帖子
关于接种密度问题' ~* z" m, y9 ?/ |2 f0 R7 B
1、如果你用了细胞因子之类的,可以10的5次方/ml接种
' Y5 ?% Q6 L+ ]  A( I/ F2、如果没加细胞因子,可以10的6次方接种。
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发表于 2012-8-13 08:17 |显示全部帖子
楼主精神可嘉,我也说一个:间充质干细胞培养应当使用树脂培养瓶,比用玻璃培养瓶的效果好很多
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发表于 2012-8-13 09:05 |显示全部帖子
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# R" m% u( P. S4 `6 q. m6 u* e2 `1 T3 u3 E, f
有利于贴壁,最好用进口的。
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发表于 2012-9-28 00:04 |显示全部帖子
从安全性角度出发BM-MSC我个人认为前景更好,当然必须是自体的,通过体外扩增的,目前体外扩增的技术都不怎么好,希望有人有更好的建议
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发表于 2013-5-17 11:36 |显示全部帖子
你们都是做人的BM-MSC吗?有没有做猴子的?

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小小研究员

发表于 2013-5-22 10:11 |显示全部帖子
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0 E/ L/ B. N8 s5 _4 a; ~7 Z1 [$ L- I* X
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