PBMC提取已经摸索好了，准备摸索CIK，麻烦懂的人进来看一下，万分感谢。。。。。.。。

meixue1130

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直接添液就行，不用离心

liutianhua

回复 113305060 的帖子6 e$ d/ W: P6 M
* a- D5 W7 N3 \8 F/ x; d
如果你第一天是这么算的话那养成CIK在15-22天吧。CIK培养就是你就随着细胞增长随着添液就是，还有你是打算用的什么培养基？是做临床还是做研究？

113305060

回复 liutianhua 的帖子1 V3 Z7 t. P- r

& x- N& C& I9 M( `2 r打算用1640培养基+10%FBS+0.5%双抗。打算先做研究，后做临床。临床是不是要用到无血清培养基，什么无血清培养基比较好？谢谢

liutianhua

回复 113305060 的帖子" |+ o+ h7 d8 l# t

0 A- \, R: ^5 S* b9 L" O" B临床是要用无血清培养基的，因为临床采血一般在50ml左右，离心下来自体血浆只有20-30ml，而临床上异体血浆是不允许的。' Y2 ?" g9 X/ c+ i* W
我是用自己研制的，具体情况在给你的另一个回复里说了。5 S& U% s- {2 ]% L4 V
PS：临床的安全性没有问题，有医院检验科的第三方检验报告。

113305060

回复 liutianhua 的帖子7 B9 y. B$ d/ }$ {# }3 w' d$ w

7 z& V- p9 x5 H5 d2 c# Z我们采用的方法是采用淋巴细胞分离液分离抗凝全血，取白膜层，也就是提取PBMC。您提到的全血离心血浆，不知道是什么方法，能否详述一下，谢谢

liutianhua

回复 113305060 的帖子5 R; Q' M* i! }* O
3 l" U2 O+ N1 d6 j* T* K* [, d( d' x
就是采完全血先不稀释，直接离心，上层就是血浆，下层是血细胞，然后把血浆吸出来，然后再稀释血细胞，密度梯度离心，大体是一样的，就是多一步离心。

113305060

回复 liutianhua 的帖子7 G0 u$ n% M& z* z& \; N0 }

. L$ h+ D+ _" }' [% ~我也看过类似文献，但他们是先离心一次，把血浆和红细胞层间的白色层吸出来，然后再稀释密度离心。请问你们把血浆层也吸出来是什么原理，血浆层不是没有细胞吗，谢谢

liutianhua

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8 f( ^/ H8 @* J  E/ o
7 I# p; M. S5 q  N1 Y" z  u) D2 B9 q血浆是为了培养细胞的时候用，这是自体血浆，这样在临床上才不会有问题。当然，用之前要灭活

113305060

回复 liutianhua 的帖子- s( S7 @  u/ I/ U3 j* Q. J- N

: K) g7 s( T5 E3 B+ C, e谢谢您的答复，我再想问一下你们血拿回来之后先离心一遍，将血浆和血细胞离心，然后再将血细胞稀释淋巴液再离心，再离心前血细胞是取血浆和红细胞中间的白细胞层，还是取除了血浆外的所有细胞层（包括红细胞）？谢谢

liutianhua

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, z4 b; k3 {, \/ [& F4 P5 f2 M1 H: u; v% G* ~
分出来血浆之后在稀释血细胞，在进行密度梯度离心那步。