PBMC提取已经摸索好了，准备摸索CIK，麻烦懂的人进来看一下，万分感谢。。。。。.。。

meixue1130

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8 x. C4 ]# V. a& l+ f: Z' N5 j7 m8 y/ v" c' D
直接添液就行，不用离心

liutianhua

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# S; K' A2 x( h9 L4 a
! p3 M$ t4 @8 q( r" s# l& g4 u如果你第一天是这么算的话那养成CIK在15-22天吧。CIK培养就是你就随着细胞增长随着添液就是，还有你是打算用的什么培养基？是做临床还是做研究？

113305060

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( i9 W6 l( X: |8 U4 `9 O( g
% I6 j, G7 h& s$ \- x6 C, ?打算用1640培养基+10%FBS+0.5%双抗。打算先做研究，后做临床。临床是不是要用到无血清培养基，什么无血清培养基比较好？谢谢

liutianhua

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  k/ r5 @* N( l8 J- B
3 e; D+ D" @# x' x8 C& i4 G( C临床是要用无血清培养基的，因为临床采血一般在50ml左右，离心下来自体血浆只有20-30ml，而临床上异体血浆是不允许的。+ v: m$ E) j! P2 Y
我是用自己研制的，具体情况在给你的另一个回复里说了。
, }$ x& G, p% y) `PS：临床的安全性没有问题，有医院检验科的第三方检验报告。

113305060

回复 liutianhua 的帖子2 _* P9 ]5 [, W- {
5 b$ X, K+ E" |1 ~
我们采用的方法是采用淋巴细胞分离液分离抗凝全血，取白膜层，也就是提取PBMC。您提到的全血离心血浆，不知道是什么方法，能否详述一下，谢谢

liutianhua

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0 z% G4 o# ?1 o& n/ ^
9 ~) `  E0 ~; G7 Z就是采完全血先不稀释，直接离心，上层就是血浆，下层是血细胞，然后把血浆吸出来，然后再稀释血细胞，密度梯度离心，大体是一样的，就是多一步离心。

113305060

回复 liutianhua 的帖子  p" A4 _( d" Y1 ?
3 w- T+ c6 u0 g4 c
我也看过类似文献，但他们是先离心一次，把血浆和红细胞层间的白色层吸出来，然后再稀释密度离心。请问你们把血浆层也吸出来是什么原理，血浆层不是没有细胞吗，谢谢

liutianhua

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血浆是为了培养细胞的时候用，这是自体血浆，这样在临床上才不会有问题。当然，用之前要灭活

113305060

回复 liutianhua 的帖子: ~, j$ `7 m0 B% Q

. a, O1 e, w5 Y8 @6 I7 e谢谢您的答复，我再想问一下你们血拿回来之后先离心一遍，将血浆和血细胞离心，然后再将血细胞稀释淋巴液再离心，再离心前血细胞是取血浆和红细胞中间的白细胞层，还是取除了血浆外的所有细胞层（包括红细胞）？谢谢

liutianhua

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" a8 m; I3 M  P$ _1 K, j4 @. w/ z6 I* u
分出来血浆之后在稀释血细胞，在进行密度梯度离心那步。