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楼主: Dongqin11
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[请教] 细胞传代   [复制链接]

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11楼
发表于 2012-8-21 09:40 |只看该作者
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各有各的好处,这还是要看你的细胞类型以及生长状态,如果想更清楚的话就做一次对照,一个采用离心,一个直接加,看哪个方法细胞的细胞量多生长状态好,不就彻底明白了

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12楼
发表于 2012-8-21 09:44 |只看该作者
可以在消化即将结束的时候,将消化液吸弃,然后加入培养液终止消化,之后吹打均匀用于接种,基本可以避免残余消化的影响
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13楼
发表于 2012-8-21 09:55 |只看该作者
对于楼上的问题,要根据细胞种类灵活掌握- M( ^! i4 `- E) b, I0 b3 {
根据本人多年细胞培养经验,对于大多数细胞比如一些成纤维细胞的传代培养,胰蛋白酶消化后不离心,直接加入适量添加血清的完全培养液,混匀,分盘传代培养即可。但需要注意的是胰蛋白酶的添加量尽可能的少,一般以正好覆盖细胞,并能成功消化即可。
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14楼
发表于 2012-8-21 10:10 |只看该作者
回复 Dongqin11 的帖子
% g+ H# g8 _: t1 A
" X$ p/ u" ?' G2 t6 g, z" t6 g用细胞刮铲刮取细胞啊。

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15楼
发表于 2012-8-21 10:16 |只看该作者
回复 Dongqin11 的帖子6 w: E8 C0 ^. g$ I9 }  z9 U

& O7 w3 j( `6 E, Q& M用于人体治疗的细胞都不能用终止消化液的啊,这种情况下一般会选用细胞刮铲刮取吧。
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16楼
发表于 2012-8-21 11:11 |只看该作者
看情况,我们实验室的规矩是都是离心后重悬的,楼主的这种情况,我个人提个粗陋的看法:很多新人做了一段时间实验后,开始学会偷懒了,总是想这里省一步,那里省一步,其实是不可取的。就事论事的话,可以省还是不可以省,得自己摸索,如果是普通细胞系,当然无所谓,大不了死了重来,但是如果是珍贵细胞系,死了,是不是很多人会选择撒个谎骗老板,总之,不要随便更换步骤,如果你自己确信自己的做法更优秀,我也支持
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17楼
发表于 2012-8-22 09:33 |只看该作者
回复 文文2012 的帖子2 v! n5 K% O) V1 x9 t0 }8 f; x

" k3 U9 h9 F+ A4 i* I是的,胰酶的量不能过多
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18楼
发表于 2012-8-23 14:39 |只看该作者
我都是终止之后离心
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19楼
发表于 2012-8-23 15:28 |只看该作者
加胰酶后孵育,趁细胞快要还没被完全消化下来的时候,弃掉大部分胰酶,留下几滴就可以把细胞完全消化下来而且加培养基后残留胰酶很少。
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20楼
发表于 2012-8-23 15:28 |只看该作者
加胰酶后孵育,趁细胞快要还没被完全消化下来的时候,弃掉大部分胰酶,留下几滴就可以把细胞完全消化下来而且加培养基后残留胰酶很少。
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