western 目的片段50-54kb，而内参就43kb，如何切胶。

jensn

关于这个问题，我想楼主是担心在转膜的时候所需要的时间不一致，但是你要考虑到一个问题，我们计算转膜时间是目的蛋白质的分子量加减10min范围，而且是对于小于120kd蛋白这样初略计算。如果是大分子量的，只能采用湿转的情况下，计算的方法又有所不同。那么对于你的内参和目的蛋白，因为他们的分子量比较接近，半干转转膜的时间在50分钟左右时不会有问题的。再者，根据蛋白质抗原抗体结合的原理，你在同一张PVDF膜或者硝酸纤维膜上加两种抗体是可以的。因此，不是很有必要进行切胶。如果你一定要分开的话，提高胶浓度，降低电泳时的电压，上个合适的蛋白MARKER，也是可以区分开的。

xiongjiedeng

这个不是什么难题吧，50—54是比较好的位置，离actin又不远；如果你们实验室对膜用得非常节省，那就对照一下maker去切吧，前提是上样量一致，不然也有误差。个人认为，既然化了大力气弄出了蛋白样本，有何必在乎一点点膜呢，建议楼主就把分离胶去掉即可

zhanglei1414

买个有50KD的预染MARKER，切的时候连MARKER一起切下来，转膜的时候也可以看见MARKER一起也转到膜上了

Donnies

用15%的胶跑会好一些，分的比较开，如果你用8%或者10%的很难分的

yueweilei

可以用大约10%的胶，稍微跑开点。转膜后用丽春红先染一下色，在剪开。这个需要你对目的条带和内参的大概位置有一定了解。