请帮我看看养的干细胞是不是老化了？还是污染了？谢谢

cuizhuzhu

回复 bty007 的帖子! p5 O' h3 a3 ~) O

& @# l# q  D( C; V2 S8 h能分享一下你是怎么养的吗!我最近也在养郁闷死了，细胞一传代就死完了！单纯用胰酶能消化下来？不是要加EDTA吗？

Donnies

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" u! b& m+ l3 {' E+ U* T+ ?' c7 I) X
: _, S$ k( B: T+ F我们一直用的是Hyclone的，便宜而且还可以，细胞培养主要是血清，基础培养基的话差别不是很大

rhmm

应该是死细胞吧或者杂质，我曾经养过神经干细胞和脂肪干细胞，也是像你这种情形，而且如果真是污染的话上清液早期倒置显微镜下应该可以看到发黑的渣滓样的东西，很密集，晚期会很浑浊！多养几次就有经验了

loveless

回复 bty007 的帖子2 K: T: p! [9 [% [% V4 H; a

, t: S& m9 Z* Y$ \" m楼主的细胞鉴定出来是间充干么？我养的也是这个样子，说是老化了，就给扔了······可是现在养的P1代好像也很像这个样子的，有点怕怕的~~~~

bty007

cuizhuzhu 发表于 2012-11-4 15:07
( c" R* B+ L' S" y5 s回复 bty007 的帖子1 M9 G: I; v, v$ T2 @2 d- O

& L# w7 r6 D: e% N: A- E. i# T能分享一下你是怎么养的吗!我最近也在养郁闷死了，细胞一传代就死完了！单纯用胰酶能消 ...

/ e' S$ l8 D; R
我用的是骨片培养法，取骨剪碎再胶原酶37度消化1小时，离心培养骨片的。
2 `" e( C" \' S8 b. x- c细胞传代还是能增值的挺快的，就是纯不纯不好说了，细胞形态差别多，也不确定是不是一种细胞。5 s! U1 S4 Y6 u; i
只用胰酶也可以消化的，干细胞对EDTA很敏感，用加它的胰酶消化细胞一定要离心，把EDTA去干净，否则对细胞不太好。

bty007

rhmm 发表于 2012-11-14 22:23
9 x. Q/ N' S# s: i3 \* @应该是死细胞吧或者杂质，我曾经养过神经干细胞和脂肪干细胞，也是像你这种情形，而且如果真是污染的话上清 ...

. R# c6 H- m8 r  M# e+ |  T$ y* Z不清楚是什么细胞，说是死细胞吧它却不漂。。贴的挺紧，而且貌似有增多的可能，但培养液却没有浑浊，应该不是污染吧，不知道是不是养出来的杂细胞

bty007

loveless 发表于 2012-11-14 22:39
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+ U$ I4 K2 g! ~2 R* D! J: p楼主的细胞鉴定出来是间充干么？我养的也是这个样子，说是老化了，就给扔了····· ...

: s: x& Y/ J/ c( [
我还没有做鉴定，正在考虑怎么鉴定好，之前养的到p5 p6就老的不行了，不知道哪里做的不好。。。准备重新养到二三代就鉴定。
5 A  ^* B  k" f% b. X# }! i我的P1应该还好吧，不知道图能不能看的到：

bty007

偶的细胞P5 p6代 没加什么因子什么的。。不知道是老的不成样子了。。还是自然分化了。。长得奇奇怪怪的。。求指教。。7 l  t' ]( p+ y  s# p! {/ |
6 a+ w# ^& S" k

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caiyu07248

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* q* I! a, K- }" g' v
) `5 i8 z2 E) v% y, `8 p我的经验，我用血清养的话，基本上养到P5,p6细胞就有分化的状态了，因为血清会促进细胞分化，血清浓度越高，细胞越是容易分化。用无血清培养基传的代次能够久一点。

zb_ming

亮的一般是杂质或细胞碎片，不是污染，对细胞影响不明显，不必在意。细胞培养中常见这种现象。