请帮我看看养的干细胞是不是老化了？还是污染了？谢谢

loveless

回复 bty007 的帖子
+ W; e' A- }$ p$ h0 E/ x7 @3 q) r4 J0 b2 m
你这个P1养了几天了？有没有加生长因子？我的P1刚贴壁的时候也是这样的，但是细胞数太少不能传代，长几天以后又开始老化~~

ditiger

建议用年轻鼠做，分出的细胞老化程度与年龄关系密切~

干细胞狂想

这么多人回复过了~ 呵呵，我养间充质快2年了，告诉你一点经验吧~ 你这个细胞没有被污染，途中圆圆亮亮的要么是快死的细胞皱缩，就是细胞触角没有贴，有点浮，这个现象在你用PBS洗后会更明显，下次你换液时可以显微镜下观察观察~ 然后你的细胞状态不好，你说才第三代，我看着像8代以上的细胞，所以推测你在传代操作过程中对细胞的机械损伤或者是胰酶消化时间没有掌握好~ 另外，很重要的一点，我想告诉大家，间充质并不是一定是长梭形，也有可能是多变型，这与细胞的培养环境是有关的~ 只不过在目前的培养液中大部分都是看到的长梭形~ 但这个也与培养液有关，比如血清来源，血清比例，培养液配置时间等~　多看看文章就知道了～～～

deshenglll

应该不是污染，主要是细胞形态不是太好啊。

bty007

loveless 发表于 2012-11-16 10:25
4 k. B( @) k! B3 i! ]+ X, |9 D回复 bty007 的帖子3 `. J1 V: A/ b4 ]4 J

9 D" t5 [/ _. S9 d/ {你这个P1养了几天了？有没有加生长因子？我的P1刚贴壁的时候也是这样的，但是细胞数太 ...

" ~( @; E, X' z) V6 B% c2 ]
呀不好意思，我对时间的时候发现17楼传的那张不是P1的，是P0第9天，我消化了换瓶养、打散细胞前拍的（原代长得不分散，有的地方很挤，有的地方很空）。- Y& W; Q5 q/ F, X. q5 j: ?
: F- l  [: h% i; F
消化了之后应该就是P1了吧，4 ?) ^8 W: f" g' y
这是P1第二天：
4 f$ n9 a0 X8 ]+ Y3 V
5 ]6 q) [1 l* P! o4 u: D1 @% Q
$ ~( _! o: c0 d. l这些是P1第六天拍的：
1 T2 q5 k2 Z" B# p* `
# ]2 s- i) X% b5 g7 D/ K
9 J+ N9 L* [* v( s  ]

bty007

ditiger 发表于 2012-11-16 12:48 . {. f' J2 Z$ ?3 l
建议用年轻鼠做，分出的细胞老化程度与年龄关系密切~

8 n* |5 S+ l1 r. G' i
嗯，我现在用的是3-4周龄的，有时觉得4-6周也好

bty007

干细胞狂想 发表于 2012-11-16 13:04 : [4 O' |9 R, `4 X
这么多人回复过了~ 呵呵，我养间充质快2年了，告诉你一点经验吧~ 你这个细胞没有被污染，途中圆圆亮亮的要么 ...

8 u" Y" p0 e  J1 E谢谢哈~我也感觉3代的看着像八九代的。。。估计是操作问题吧。。正在重新养细胞。。
- h, _3 N0 J- M* b我想问下这样提出来的细胞能直接做后续检测吗？比如说成骨诱导。。还是要提纯下细胞再做？不提纯做出的结果可信吗？$ @) P% T) U* P9 L$ G
还有流式分选后的细胞据说状态不太好，基本不能用了，有什么比较好的提纯方法吗？求指教，谢谢

bllx58

我们实验室也做MSC
9 l2 x: p: k$ I1 Y2 m6 u5 l+ A8 P' [. K2 G
楼主的细胞老化得很严重，建议不要再养下去
- m  _% s, X( q+ V; Z0 v: V' J
( q( k# s+ m; b" U. \! }. L  l推荐Hyclone的培养基，效果不错

rhmm

回复 bty007 的帖子0 E( A& F9 }0 u6 q. `- ^
3 C4 b6 f3 }( ?+ w/ v# n
感觉你的细胞活性不是很好，胰酶使用也是很关键的，我个人体会，对于神经干细胞还是用Hyclone的，脂肪干细胞要用Gibico的，而且用量和消化时间要根据你取材的量而变化，不能照本宣科。有时候文献报道出来的是一回事，你要慢慢摸索出自己的一套方法。

wangxiaowei0917

其实你这个细胞应该是因为老化代数高了，或者是因为你没有很好的维持住他的干性，导致一定程度的分化了。白点不是污染。