我两细胞都养不活啊！有木有啊！请教无血清培养基中各成分的影响

weiyepan

6 D- L4 p* a5 q/ M! A% Q
& H, F' D# ~5 G* w1 ]  a/ W我养的两种Lung Cancer的细胞，都是ATCC买的H2126和H1573都养死了，不知道是不是培养基配的问题，请教一下大家有没有养过这种细胞或者用过这些添加剂。其中H2126养的第一代还是好好的，第二代就挂了，用的培养基是同一批配的，就是第二代的培养基冻过-20度，这样影响会很大么？应该都没有污染的，细胞自己漂起来了，不知道怎么回事。7 i) ~' c' ~8 u, m
1. HITES medium for H2126/ \6 s+ P+ z: H  c' q% v
DMEM:F12 Medium adds
& m+ b. a& F. \' K4 t0.005 mg/ml Insulin * Z# {9 O" E1 D2 L
0.01 mg/ml Transferrin
) J# [9 T/ Y+ [7 U. I8 e! w" u/ c30nM Sodium selenite (final conc.)+ U& g1 z# q& R: Z5 R' z2 A
10 nM Hydrocortisone (final conc.) % I1 C2 B6 ?/ Z- y- _
10 nM beta-estradiol (final conc.)
; [2 I, y6 }: U# Pextra 2mM L-glutamine (for final conc. of 4.5 mM)
0 W9 Q% }$ D* V% C( {filtrated with 0.22um filter  D# {( G; O& [! m
5% fetal bovine serum (final conc.)
: m: N' `$ G$ Z; j& w; a; ^/ m8 O6 F0 h
2. ACL-4 medium for H1573
; e8 e+ ^- r9 }/ IDMEM:F12 Medium adds5 }7 `# t3 D  B* Y' ?
0.02 mg/ml insulin
9 Z: D+ X* B- T/ H" I8 ]7 F8 b0.01 mg/ml transferrin
$ }7 @+ [5 s# X0 K% W( @25 nM sodium selenite (final conc.)
) G: d' _9 i- V50 nM Hydrocortisone (final conc.)# f! Q5 c! i' U9 s0 D5 H
0.01 mM ethanolamine (final conc.)
5 m- E; i' K; C" O- W: m& X0.01 mM phosphorylethanolamine (final conc.)
+ G" B8 J- `1 C9 C. _  }+ g100 pM triiodothyronine (final conc.)
$ I3 V% V& V3 t) A1 C0.5% (w/v) bovine serum albumin (final conc.)7 {& G: s6 l3 P) H% m
0.5 mM sodium pyruvate (final conc.)
) S) P8 B( j0 kextra 2mM L-glutamine (for final conc. of 4.5mM)0 f6 F: A4 X2 ~# _
filtrated with 0.22um filer
: G: v4 C& E; V$ U! V. O1 ng/ml Epidermal Growth Factor (do not filter)
! j8 \+ k3 E7 T4 e% N' q8 V# L

yuli521

你在培养时有没有加血清呀？我也在做这方面的实验，加点血清能维持细胞的生长，不加血清的就会慢慢死掉。

ditiger

需要完全按ATCC上说的做，否则，死了也没法申诉。。。

lazyworm

0.5% (w/v) bovine serum albumin (final conc.)浓度会不会太低了，一般的肿瘤细胞我们都是用10%血清。冻存的时候是怎么冻存的呢，是不是冻存过程不对影响了存活了呢？

weiyepan

回复 yuli521 的帖子5 u3 Y7 }9 t! R% ]
! i) ~+ x! Y. l& r, [% d* L
其它细胞都有加的血清，就这个ATCC上写的一个低血清一个不加血请。加了不知道会有什么影响。

weiyepan

回复 lazyworm 的帖子
; v% u7 V# k' d6 t/ I1 `0 u$ V3 f+ W3 K# H  ?
细胞是直接从ATCC买的，他们冻存的。0.5% (w/v) bovine serum albumin 是白蛋白，不是血清的说。下面的这个是无血清培养的

Donnies

是肺癌吧？我们实验室一直都有人养这种细胞，用的是普通的DMEM，养的很好

goohongzi

兄弟啊，细胞飘起来并不一定死掉了。有可能是培养基的PH不对，也有可能是各种原因，比如培养箱里没有水了，只要细胞有折光性，千万不要冒然扔掉，离心一下，然后接着养。我们养细胞从来不按照ATCC的要求来（除非特殊成分另加入），肿瘤细胞只要ATCC买的，一律DMEM或者1640，从来没死过。

weiyepan

+ |$ V, l1 `. N# ]

& M5 D1 K+ M) x+ G* R回复 goohongzi 的帖子
' u; ]; t9 N7 M3 P) W1 c6 ^# }' q8 }: I& z; e
我漂的细胞用台盼蓝染过了，都是死的。只有零星一两个活的。4 R* f) [0 |0 B2 S! L+ l( D
我同时养着13种ATCC买的细胞，其它都长得好好的，就这两个出问题了。
9 m, j6 |; e: ]4 K" V我是按照ATCC的网站上配方做的，不知道用DMEM和1640对这两种细胞有什么影响。如果改变了细胞性质，那只是养活也没什么意思。