单细胞克隆、克隆形成实验、肿瘤球培养

细胞海洋

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# R! D  @  t& V; J# b
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YMM

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, M1 v5 V4 M9 J2 I$ G5 f8 M# ^
好的，谢谢

86964109

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5 X1 n. p0 f3 I% @3 w9 ]1 G0 K$ Q& z/ l2 H' g6 i
sorry，好久没来了，才看见，不过我也不是专门做这个的，
' J/ F5 g. G! Y一 Single-cell cloning self-renewal assay这个也不太了解，看看这几篇文献是否有用http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC319624/; P- e" ]/ M6 J
http://www.pnas.org/content/105/36/13427.full
8 Y8 Y5 Q0 G2 G' |' }9 X& a" j; U二 至于克隆形成实验网上成型的protocol应该有很多了，我们一般就这么做
6 R: G6 `% [) M! g+ I/ S1细胞培养于含有10％胎牛血清的DMEM培养基中，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，细胞贴壁生长。实验均选用对数生长期细胞。* M8 v% z6 P) L! n
2细胞铺板：前一天将培养瓶中细胞用0.25%胰蛋白酶消化，接种100细胞至6孔培养板中，，在37 ℃、5％CO2、饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养2-3周。5 J5 s' ]% L6 i% c/ G* z1 ~. k- |; N
3当出现肉眼可见克隆时，终止培养，弃去培养基，甲醇固定，Giemsa染色试剂盒进行染色。% ?" U* H9 X* P: V" W- C! M
4弃固定液，滴入染色液I覆盖细胞表面，室温染色8 min，加入2倍体积染色液II，反应3 min，弃去染液，PBS清洗，镜下观察计数。（克隆形成率=克隆数/接种细胞数×100%） " s- W6 m+ m% ?" q
大概就这样，很多文献中还会提到铺上琼脂什么的，

YMM

回复 86964109 的帖子+ s* Q5 y1 y; ]  D3 |

  K2 t/ a1 S) P! o) a. m: W7 d嗯，好的，我再查查相关资料。非常感谢您的热情帮助

wenyoubiepa

( o; c& X9 ?! f  i( a' o
. f' u( R& X6 e回复 86964109 的帖子8 B5 H6 f0 l: u) {

: o$ z4 g8 z! }( Z- H$ `8 y受教了，我也想做肿瘤球培养实验，您传我一份详细的操作步骤吗？谢谢！

86964109

回复 wenyoubiepa 的帖子8 w! x" ~7 l" b2 g+ }% ?

+ L: v. T# |3 H) A% H不好意思，我也没养过，得到的信息都是来源于网络中大家分享的，http://www.dxy.cn/bbs/topic/16920599 ，# s. Y4 F2 {7 W( S
http://www.google.com.hk/search? ... 3%E5%9F%B9%E5%85%BB
- _; }6 G) B& E  S, R: b* chttp://www.csno.cn/pdf/2011/1/7.pdf; L3 I- I# ^) ~+ d
可以看下是否对你有帮助，还是建议直接google比较好