单个核细胞分离无白膜层原因

zhuzhentulip

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8 A" l$ g. h/ j" p( r# J4 E8 r8 }9 X$ D$ d/ C
好的 明天也试看看

hwlightning

50ml人外周血为例
. g3 V# ^" g6 Y+ ~先离心收集血浆，然后用DPBS稀释血液混匀至50ml
% ?5 O  ]; }( @* P' h7 y- R1 g6 b取两管Ficoll（天津灏阳）20ml/管，分别加入25ml稀释的血液，倾斜缓慢加入  w2 j3 B) B, F: Y4 R1 A4 T
800G 20min   升速和降速都为最小值

zhuzhentulip

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7 J( _( l& w2 }# `3 Q& Q
我试过了，这样分离后白膜层很明显，谢谢你，我们还是用的Ficoll（天津灏阳）

hwlightning

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% |5 }. ?6 \* z
+ r/ Q* |  K& i- k4 X, h. A; h; z7 u不用谢

lyj-0017

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0 J0 ~$ f4 j& D0 o
+ K6 X9 b! E3 o5 n$ P: o, x请问，采集的这50ml抗凝血是直接加入1支50ml离心管中离心收集血浆？还是分别加入多支50ml离心管，经稀释后再离心收集？转速设置多少不会对细胞有影响？谢谢！

chenguangyu

1.分离液太少，按1：2加。加时勿打乱分离液液面。6 d( I# Q4 Z* m, O
2.全血去血浆后多稀释一点。
. ]! [. L0 Y2 u, b0 [/ c# R* u3.加减速度调低一点。
* S0 @" w1 Q. A- Q7 `+ F! j4.可以选用50ml离心管。

312473313

我们的是按血：PBS=1:1-1.5稀释， 稀释后的全血缓慢地加到同等体积的ficoll上，我们一般用的50ml离心管2000转20分钟慢升慢降进行离心的 可以参考下

guanjun1314

就是用2支50ml的离心管来分离就行了，Ficoll分离液与稀释全血的比例为1：1，2000转20分钟离心，这样就能得到较清晰的白膜层，也有个体差异的原因会出现不同清晰度的层次，但都会分得清的

吕小松

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7 @0 E2 P' F: s% ?1 ^7 Z
6 ?- @! X7 V' j# ]& u# V: |0 B请问收集完血浆，我用生理盐水1:1稀释血细胞混匀，然后缓慢加到Ficoll中，稀释后的血细胞与Ficoll的量是2:1，然后离心是2500rpm，30分钟，无刹车减速，分离后的白膜层可以看到，但是白膜层下面的ficoll层不清澈，有云雾状的东西，这是什么原因呢，我也是最近用的天津灏洋的ficoll，望解答！

hwlightning

回复 吕小松 的帖子2 V- [6 {; L5 H3 F9 J/ _* [5 p% e$ \
. a1 p4 P, B0 m  _9 Y) r
你Ficoll的量是不是少了一点，我们也用的天津灏阳的，现在天津灏阳科研级别的Ficoll分离效果变差了，所以我改用了临床级别的。
9 J4 i% O* R/ \还有就是不同人的血分离效果也不同（特别是肿瘤患者）。其实这些对你培养细胞影响不会很大。