单个核细胞分离无白膜层原因

zhuzhentulip

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3 M. v' p: y9 k+ x) j5 j4 J好的 明天也试看看

hwlightning

50ml人外周血为例
5 u) \( V! J' W先离心收集血浆，然后用DPBS稀释血液混匀至50ml
' g& Y% Y' s) D) [* T取两管Ficoll（天津灏阳）20ml/管，分别加入25ml稀释的血液，倾斜缓慢加入
* h% R& ?# ~5 t$ |9 H4 m: ]% ~$ B/ w800G 20min   升速和降速都为最小值

zhuzhentulip

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( A* W$ x: M4 z, D; ?6 `  x  |2 Z, w- G" J! N
我试过了，这样分离后白膜层很明显，谢谢你，我们还是用的Ficoll（天津灏阳）

hwlightning

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6 m9 e  W0 v9 A
不用谢

lyj-0017

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3 O: u. @* E# i+ ~/ R# E4 R
  g3 h' w9 M0 P请问，采集的这50ml抗凝血是直接加入1支50ml离心管中离心收集血浆？还是分别加入多支50ml离心管，经稀释后再离心收集？转速设置多少不会对细胞有影响？谢谢！

chenguangyu

1.分离液太少，按1：2加。加时勿打乱分离液液面。- o9 [" Z3 j+ W- h4 c7 I, Y/ {; }7 O
2.全血去血浆后多稀释一点。! h  E: D& c+ J' k! q# d
3.加减速度调低一点。
" N4 t/ k: F0 _* [5 m1 L4.可以选用50ml离心管。

312473313

我们的是按血：PBS=1:1-1.5稀释， 稀释后的全血缓慢地加到同等体积的ficoll上，我们一般用的50ml离心管2000转20分钟慢升慢降进行离心的 可以参考下

guanjun1314

就是用2支50ml的离心管来分离就行了，Ficoll分离液与稀释全血的比例为1：1，2000转20分钟离心，这样就能得到较清晰的白膜层，也有个体差异的原因会出现不同清晰度的层次，但都会分得清的

吕小松

回复 hwlightning 的帖子" w, k4 H' E- ?. o

. e6 |( Q( m0 l; H+ Y: y. f% v请问收集完血浆，我用生理盐水1:1稀释血细胞混匀，然后缓慢加到Ficoll中，稀释后的血细胞与Ficoll的量是2:1，然后离心是2500rpm，30分钟，无刹车减速，分离后的白膜层可以看到，但是白膜层下面的ficoll层不清澈，有云雾状的东西，这是什么原因呢，我也是最近用的天津灏洋的ficoll，望解答！

hwlightning

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2 q5 f- T8 i& `7 K% s$ ]& A& G( C( X
你Ficoll的量是不是少了一点，我们也用的天津灏阳的，现在天津灏阳科研级别的Ficoll分离效果变差了，所以我改用了临床级别的。
$ H# v: f* R% f) Z还有就是不同人的血分离效果也不同（特别是肿瘤患者）。其实这些对你培养细胞影响不会很大。