染S100 和 GFAP的小问题

等待feng

回复 huangcong1988 的帖子
/ u! @! Q8 r, I( ~6 e/ M5 O/ G3 u6 B1 [9 ~6 D
步骤就是  PBS洗三遍  多聚甲醛固定30分  再洗三遍  加打孔的  然后再洗三遍  加一抗  4度冰箱过夜 第二天37度 一小时 然后洗三遍  加二抗，然后再三十七度一小时   然后PBS三遍  封片嘛    大家应该都这样做的啊

等待feng

回复 guofei5821 的帖子6 E# a' G0 e6 t! }; d! K
) @" j, n  ^4 I9 G* c
应该没问题   用时细心的看了

dianying

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! V# w) z/ t1 j1 g2 i" X1 G; e, @
你还是先分着染，S100很容易染，先放放。
7 m8 ?8 \* R9 J5 D8 {) s染gFAP:3 G0 n7 \3 T5 O
1)你固定的时间15分钟就可以；
5 J3 Z3 Y+ T6 G2)你的步骤里没有封闭
; _. T+ Y/ ?4 X你先试试用5% BSA to block,用一半的blocking buffer 加你的一抗、二抗。一定要当天配的BSA。/ I- N; S8 M* C  z
我不明白你为什么要配一抗，一抗不是买现成的吗？

dianying

回复 细胞海洋 的帖子+ Q  v/ f: F; j: f; O( E
& f6 {8 {9 K  L2 o- _' B- _
谢谢你的提醒，我现在换成google chrome 了，这个没问题了。看来internet explorer 是要破产了，在别的地方也有同样的问题，只是没多想。0 z2 R7 m4 J) W0 s% v
非常感谢！

dianying

回复 等待feng 的帖子4 ~, w9 \) l2 U0 Y
5 n' n5 l  e3 w  i2 ]
也不尽然！如果你光看外表长得像猪八戒还不行，你还需要检查他是不是好吃和懒做...$ G! n* y& d6 U2 ~7 F
你光拿染色来下定义真的不够，还是要做一些功能上的检测。诱导过来的细胞本来就复杂，慢慢试。

等待feng

回复 dianying 的帖子9 v; K# W. \: W2 C3 N
" j7 f2 N2 p4 M8 Y) Q8 H- z* f
细胞的免疫染色不用加BSA吧？一抗是买的现成的  但要稀释嘛

等待feng

回复 dianying 的帖子
4 Z" ]7 Y9 C, ]# b
" l1 B9 m0 T" p# a你说的挺对，但荧光染色是前提嘛，如果连特异性抗体染色都染不上的话，功能什么的就更不是了。。。

dianying

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; Y" ^- z9 x* y/ l  B
! O2 Y( b) X) ^1 ^, a! I( n1 v你不用BSA没关系，但是blocking 是必须的。

dianying

回复 等待feng 的帖子
5 t) x. y: l, \9 @6 R- q5 P& c& c, z1 ?7 O2 A
你说得也有道理，但是你染上了S100 没染上gFAP不能说是雪旺什么的，结论太早。