染S100 和 GFAP的小问题

等待feng

回复 huangcong1988 的帖子' `$ R3 [( [/ K6 P
2 U" C$ N- z8 }  d/ X
步骤就是  PBS洗三遍  多聚甲醛固定30分  再洗三遍  加打孔的  然后再洗三遍  加一抗  4度冰箱过夜 第二天37度 一小时 然后洗三遍  加二抗，然后再三十七度一小时   然后PBS三遍  封片嘛    大家应该都这样做的啊

等待feng

回复 guofei5821 的帖子
( l8 @2 u8 ?! D% f# ^+ q
: K: X+ w/ k  y5 f( o应该没问题   用时细心的看了

dianying

回复 等待feng 的帖子2 m" u0 t. Q6 B0 a
. }0 G, a1 _% Z! B) \8 D7 p
你还是先分着染，S100很容易染，先放放。& `0 K3 P  V0 g& H& z7 X! e: ], d) L/ o
染gFAP:5 C2 c+ P, W0 f. T& G- G
1)你固定的时间15分钟就可以；: Y# T& H5 j. o/ I8 j) I- A4 H
2)你的步骤里没有封闭" U" b8 ]0 ]0 X2 X" g
你先试试用5% BSA to block,用一半的blocking buffer 加你的一抗、二抗。一定要当天配的BSA。4 @. Q% M: N2 Y
我不明白你为什么要配一抗，一抗不是买现成的吗？

dianying

回复 细胞海洋 的帖子
7 ^2 t& S. y, C# `, J
, O6 K8 W5 j) u谢谢你的提醒，我现在换成google chrome 了，这个没问题了。看来internet explorer 是要破产了，在别的地方也有同样的问题，只是没多想。
3 I* }; u+ c$ |$ M非常感谢！

dianying

回复 等待feng 的帖子
8 i+ F/ y- {" }1 ~: g+ [* [$ X8 @- J9 t7 O% C
也不尽然！如果你光看外表长得像猪八戒还不行，你还需要检查他是不是好吃和懒做.../ Y: P! _" a3 z- @% f* x
你光拿染色来下定义真的不够，还是要做一些功能上的检测。诱导过来的细胞本来就复杂，慢慢试。

等待feng

回复 dianying 的帖子
9 `8 f# R+ X; j& E# S3 Y8 M/ i! w5 ?6 f* U
细胞的免疫染色不用加BSA吧？一抗是买的现成的  但要稀释嘛

等待feng

回复 dianying 的帖子, w( x* b; G/ I& u3 v

' ]5 M6 _9 V/ L% Q: N你说的挺对，但荧光染色是前提嘛，如果连特异性抗体染色都染不上的话，功能什么的就更不是了。。。

dianying

回复 等待feng 的帖子; q( W$ b" b5 ?
" n+ C! n5 w& Z. W( w: i
你不用BSA没关系，但是blocking 是必须的。

dianying

回复 等待feng 的帖子3 g7 L- }3 q7 V; V  W* }

( H7 |: s0 ~+ }3 W* ~+ S2 s你说得也有道理，但是你染上了S100 没染上gFAP不能说是雪旺什么的，结论太早。