染S100 和 GFAP的小问题

等待feng

回复 huangcong1988 的帖子3 M) F. y& o& d
$ c2 b7 u1 C! p- y9 l5 m6 z
步骤就是  PBS洗三遍  多聚甲醛固定30分  再洗三遍  加打孔的  然后再洗三遍  加一抗  4度冰箱过夜 第二天37度 一小时 然后洗三遍  加二抗，然后再三十七度一小时   然后PBS三遍  封片嘛    大家应该都这样做的啊

等待feng

回复 guofei5821 的帖子& w8 Y/ w6 D* [
+ ?- s! k0 f7 |& i4 T
应该没问题   用时细心的看了

dianying

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6 {9 H$ Y4 G( k+ j; d  K% {2 E; D2 A" S6 l/ m
你还是先分着染，S100很容易染，先放放。+ F2 Q: ]- o4 n8 }" U  r3 o: m
染gFAP:
* B* J7 E" R- u3 m- n6 `7 C/ K0 } 1)你固定的时间15分钟就可以；; B8 r. E& j. O# ]/ H
2)你的步骤里没有封闭" M' ~# R* U' F+ t$ g8 T5 U
你先试试用5% BSA to block,用一半的blocking buffer 加你的一抗、二抗。一定要当天配的BSA。
) S8 ^  P. b- C2 \7 H我不明白你为什么要配一抗，一抗不是买现成的吗？

dianying

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6 H! w4 C& C9 t. y0 V2 d; g% l
) T  J6 k% u# n3 q( ^0 H7 k谢谢你的提醒，我现在换成google chrome 了，这个没问题了。看来internet explorer 是要破产了，在别的地方也有同样的问题，只是没多想。
/ {# O  k6 t1 S2 G+ Y- ^0 p. d非常感谢！

dianying

回复 等待feng 的帖子/ S" V' o' I8 L' {* L

: X6 [2 ?1 Z, J  ^; E2 b也不尽然！如果你光看外表长得像猪八戒还不行，你还需要检查他是不是好吃和懒做...* W5 Z$ ?( e. z4 S( L- G
你光拿染色来下定义真的不够，还是要做一些功能上的检测。诱导过来的细胞本来就复杂，慢慢试。

等待feng

回复 dianying 的帖子" L/ d8 W2 }1 [( q; H  T
7 S  ^: B: e' O; y  M; C0 n
细胞的免疫染色不用加BSA吧？一抗是买的现成的  但要稀释嘛

等待feng

回复 dianying 的帖子5 G6 P, M9 l! o4 ~
7 Z# Q, M3 R2 n1 {8 l; a- f
你说的挺对，但荧光染色是前提嘛，如果连特异性抗体染色都染不上的话，功能什么的就更不是了。。。

dianying

回复 等待feng 的帖子8 H5 X% F6 A: d* D9 p# h
- n5 Z1 h3 E  F! ?" k2 `
你不用BSA没关系，但是blocking 是必须的。

dianying

回复 等待feng 的帖子+ Q* K" J* _+ C( Z5 s

- {8 M1 y, L' e8 Y你说得也有道理，但是你染上了S100 没染上gFAP不能说是雪旺什么的，结论太早。