大鼠骨髓间充质培养求鉴定附图

湖南干细胞

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  ~- ^& Y! z7 L2 q3 f/ q; t回复 老姜 的帖子% G- _* W3 d+ n  V

! c/ V& C1 A9 |恩，消化方面确实很重要。现在全骨髓贴壁法养到第二次传代完了。淋巴分离液养到第一次传代，但是第一次传代的细胞养了6天，2天1次换液，约长到60-70%融合，昨天部分细胞碎解了，折光性明显变差，部分细胞旋涡状生长得很密集但是没有继续向周边生长了，是不是应该传一下代了？如图为淋巴分离液法昨日PBS洗涤后的细胞状态。

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9 j1 t0 x+ ~- s* u请教redmoon，ACK纯化是指什么方法？百度和CNKI上都没有介绍。

老姜

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$ |/ m, c; K0 `, h- u: S左图看的不是太清楚，但右图是应该传代了，细胞接触再不传代细胞相互分泌钙使细胞粘连的紧，消化时细胞易成片脱落，不易打散为单个细胞，从而减少细胞的收获量。

老姜

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左图是不是一堆细胞周围的细胞稀疏？如果不是原代细胞生长成这样，是传代细胞长的太密，相互分泌钙不易打散或接种后细胞没有摇匀，使得分布不均所致。好像右图是它的高倍照射，若真是这样，也该消化了，明天再消化一样不易消化为单个核细胞——因为细胞相互接触的时间又长了。。。。( Z8 T, W1 z9 g# V( T

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下图是上图的放大，是淋巴分离液第一次传代后未消化下来的细胞添加培养液继续培养5天后的图。我今日试着消化了一下，没有传代，只是继续培养。因为细胞并没有长满，只是部分地方长满了，且培养瓶缺货。

老姜

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* A' }1 ^- D( i; l7 b7 `8 f0 r4 \- v有这种情况，未消化下来的细胞继续加培养液还能长。可它与已消化的细胞不同步了，因为稀疏的未消化细胞即使长成这种团，也很难铺满瓶，除了留更多未消化的细胞，这团中生长接触的细胞再养下去只会变老，相互粘连紧密，难以消化为单细胞，大多消化下来为片状，细胞收获量自然少。这细胞若要，现在就消化能收多少细胞算多少，收获的太少则弃之，太少没养的价值——耗时又耗精力。别为此纠结！

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原来如此。好的，

骨科小明

胰酶消化2分钟就行了

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也在养大鼠间充质干细胞，感觉这细胞很好养的，你的细胞好像胰酶消化时间太长了，1min就差不多。掌握不好时间可以试试Typle胰蛋白酶替代剂，前些日子刚用，效果不错。