骨髓间充质干细胞成脂、成骨诱导分化

shagu

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7 z+ D! A' f7 g回复 李兰兰 的帖子
" A; x/ i1 J6 P$ w7 h' u/ ^
- ~$ G3 l) Q1 k. Y密度大概1x10的6次方，成脂是10天时染色，成脂失败，成骨现在第17天，细胞有铺路石的样子，细胞间错综交叉呈网状，但看不到肉眼的钙化结节，问一下楼主：3 Q8 z6 I5 q: G" c8 s$ Y( W1 r& n
1、染色得适宜时间是？" z! M3 V  j3 M
2、用ALP染过色的细胞还可以用茜素红染色吗？必须的用ALP染色才有说服力吗？
% _9 H% E3 l; t! M3、1xPBS可以用普通PBS即一袋配2000ml的代替吗？5 b" o2 S  V  o5 R
            哈哈，谢谢楼主慷慨解困！

李兰兰

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( l) h8 L0 _4 D, d7 ~) t1 W- `3 l我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴，成骨的话不感觉是细胞上沉积了一些钙盐。成骨我是直接用的茜素红染色的，成脂用的油红O染色的。

李兰兰

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我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,约８０％融合时开始诱导，成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴，成骨的话感觉是细胞上沉积了一些钙盐，但不是很明显。如果你的细胞活力还可以的话，建议可以多诱导几天，这样染色图片更漂亮。成骨我是直接用的茜素红染色的，成脂用的油红O染色的。$ s4 P  C, D7 t% f
另外ＰＢＳ我实验室用的是配好的呈瓶的，自己没有配。. D$ I. g# _' c1 q
我当时预实验是成骨、呈脂分别诱导了三个皿，这样便于观察，可以不同的诱导时间染色，不然染色失败的话，时间等的太久。结果染色图片还是蛮漂亮的。  {1 u2 |, P7 a
不知道你的间充质干细胞有没有做过鉴定呢？我的做了流式细胞仪细胞表面抗原鉴定。) K9 i6 {& Z9 w5 w
建议你的呈脂诱导时间长一些，１０ｄ不够吧。
. U+ @$ L" G( |  Z" d以上仅是参考，不知你诱导液成分。

李兰兰

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8 w+ m  _' p; S' |另外染液油红O一定要过滤或者离心，不然染液的絮状物影响图片质量。
, A1 ]  O/ M' |3 t2 T你做间充质干细胞哪方面的实验啊？

shagu

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- p8 k) O- ]% h6 M9 R
9 Z- E+ B7 B& E8 t非常感谢您！这段时间忙执业医，就没回家看看，细胞再次做起！我的诱导液买的现成的，可以看看你的成脂诱导和成骨诱导图片吗？这是我的成骨诱导，应该成功了吧！

shagu

0 q6 m( Y9 s2 M. N4 t6 [" B4 g. M  x0 O5 c
刚才图片没传上，

沁蓝之城

我现在成骨和成脂一直诱导不出来，很急。我用的是gibco的现成的诱导液，但效果很不理想

细胞海洋

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5 [# R# Z/ F: f9 y建议你发新帖提问

小公

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3 q+ @% l9 ]3 G1 Y( |0 P
" h9 ]  w6 a. C7 _/ d4 G你好，我自己提取的间充质干细胞，需要进行分子标记物鉴定和诱导分化，很多问题请教你，1 分子鉴定的标记物，买的哪家的，具体单标的荧光如何选择的？ 2 诱导分化是自己配置的诱导液吗？ 谢谢

luyue6453

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能发两张您的成骨成脂的诱导成功图片吗？我现在正在做，想参考一下