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楼主: 李兰兰
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骨髓间充质干细胞成脂、成骨诱导分化   [复制链接]

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发表于 2013-6-30 10:48 |只看该作者
本帖最后由 shagu 于 2013-6-30 10:56 编辑
+ q2 F( ^/ H+ j, ]1 P6 ^- m' X5 l
7 z+ D! A' f7 g回复 李兰兰 的帖子
" A; x/ i1 J6 P$ w7 h' u/ ^
- ~$ G3 l) Q1 k. Y密度大概1x10的6次方,成脂是10天时染色,成脂失败,成骨现在第17天,细胞有铺路石的样子,细胞间错综交叉呈网状,但看不到肉眼的钙化结节,问一下楼主:3 Q8 z6 I5 q: G" c8 s$ Y( W1 r& n
1、染色得适宜时间是?" z! M3 V  j3 M
2、用ALP染过色的细胞还可以用茜素红染色吗?必须的用ALP染色才有说服力吗?
% _9 H% E3 l; t! M3、1xPBS可以用普通PBS即一袋配2000ml的代替吗?5 b" o2 S  V  o5 R
            哈哈,谢谢楼主慷慨解困!
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发表于 2013-6-30 23:33 |只看该作者
回复 shagu 的帖子0 M! p2 n! C! d' }% V

( l) h8 L0 _4 D, d7 ~) t1 W- `3 l我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴,成骨的话不感觉是细胞上沉积了一些钙盐。成骨我是直接用的茜素红染色的,成脂用的油红O染色的。
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发表于 2013-6-30 23:43 |只看该作者
回复 shagu 的帖子& K( Z/ c* d: f( T* N6 U
2 f& N; W3 ]2 j0 b7 D& O( \
我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,约80%融合时开始诱导,成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴,成骨的话感觉是细胞上沉积了一些钙盐,但不是很明显。如果你的细胞活力还可以的话,建议可以多诱导几天,这样染色图片更漂亮。成骨我是直接用的茜素红染色的,成脂用的油红O染色的。$ s4 P  C, D7 t% f
另外PBS我实验室用的是配好的呈瓶的,自己没有配。. D$ I. g# _' c1 q
我当时预实验是成骨、呈脂分别诱导了三个皿,这样便于观察,可以不同的诱导时间染色,不然染色失败的话,时间等的太久。结果染色图片还是蛮漂亮的。  {1 u2 |, P7 a
不知道你的间充质干细胞有没有做过鉴定呢?我的做了流式细胞仪细胞表面抗原鉴定。) K9 i6 {& Z9 w5 w
建议你的呈脂诱导时间长一些,10d不够吧。
. U+ @$ L" G( |  Z" d以上仅是参考,不知你诱导液成分。
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发表于 2013-6-30 23:47 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 shagu 的帖子7 p+ `( b0 S& K% @& F% \. E% Y

8 w+ m  _' p; S' |另外染液油红O一定要过滤或者离心,不然染液的絮状物影响图片质量。
, A1 ]  O/ M' |3 t2 T你做间充质干细胞哪方面的实验啊?
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发表于 2013-7-15 17:08 |只看该作者
本帖最后由 shagu 于 2013-7-15 17:15 编辑
$ q. q' P) r* D" r$ }- k" c0 k$ M! n- ~; o$ A6 w& Z, p. A
回复 李兰兰 的帖子
- p8 k) O- ]% h6 M9 R
9 Z- E+ B7 B& E8 t非常感谢您!这段时间忙执业医,就没回家看看,细胞再次做起!我的诱导液买的现成的,可以看看你的成脂诱导和成骨诱导图片吗?这是我的成骨诱导,应该成功了吧!
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发表于 2013-7-15 17:30 |只看该作者
本帖最后由 shagu 于 2013-7-15 17:34 编辑
0 q6 m( Y9 s2 M. N4 t6 [" B4 g. M  x0 O5 c
刚才图片没传上,
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发表于 2013-7-17 17:02 |只看该作者
我现在成骨和成脂一直诱导不出来,很急。我用的是gibco的现成的诱导液,但效果很不理想

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小小研究员

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发表于 2013-7-19 00:22 |只看该作者
回复 沁蓝之城 的帖子/ S; D+ d) G/ a. v9 |

5 [# R# Z/ F: f9 y建议你发新帖提问

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发表于 2013-7-25 16:24 |只看该作者
回复 李兰兰 的帖子
3 q+ @% l9 ]3 G1 Y( |0 P
" h9 ]  w6 a. C7 _/ d4 G你好,我自己提取的间充质干细胞,需要进行分子标记物鉴定和诱导分化,很多问题请教你,1 分子鉴定的标记物,买的哪家的,具体单标的荧光如何选择的? 2 诱导分化是自己配置的诱导液吗? 谢谢
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金话筒 优秀会员 美女研究员 积极份子

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发表于 2014-5-31 10:42 |只看该作者
回复 李兰兰 的帖子1 b+ E9 o$ i  D0 X% P8 j1 k
( J) i) q7 X9 \5 g
能发两张您的成骨成脂的诱导成功图片吗?我现在正在做,想参考一下
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