骨髓间充质干细胞成脂、成骨诱导分化

shagu

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密度大概1x10的6次方，成脂是10天时染色，成脂失败，成骨现在第17天，细胞有铺路石的样子，细胞间错综交叉呈网状，但看不到肉眼的钙化结节，问一下楼主：
( ?6 [% e9 b8 d% t9 f7 I- L$ x1、染色得适宜时间是？, E+ f% w4 i( [; v6 r2 q
2、用ALP染过色的细胞还可以用茜素红染色吗？必须的用ALP染色才有说服力吗？
4 J" t- J3 h2 H# g3、1xPBS可以用普通PBS即一袋配2000ml的代替吗？
: B6 U9 b6 E* w5 q# t% j- V9 ]( w            哈哈，谢谢楼主慷慨解困！

李兰兰

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+ S2 B' q6 s) n! _5 V4 x我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴，成骨的话不感觉是细胞上沉积了一些钙盐。成骨我是直接用的茜素红染色的，成脂用的油红O染色的。

李兰兰

回复 shagu 的帖子. v$ H* d( F, V& F  ~

; g) }8 y$ O3 F/ G( t9 _7 O我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,约８０％融合时开始诱导，成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴，成骨的话感觉是细胞上沉积了一些钙盐，但不是很明显。如果你的细胞活力还可以的话，建议可以多诱导几天，这样染色图片更漂亮。成骨我是直接用的茜素红染色的，成脂用的油红O染色的。' @+ ~: b- U# q$ H! K% V
另外ＰＢＳ我实验室用的是配好的呈瓶的，自己没有配。1 V# d2 R: j: q" z* W! G3 J
我当时预实验是成骨、呈脂分别诱导了三个皿，这样便于观察，可以不同的诱导时间染色，不然染色失败的话，时间等的太久。结果染色图片还是蛮漂亮的。
  }9 u  V0 S: ^4 M$ P6 h% C2 v不知道你的间充质干细胞有没有做过鉴定呢？我的做了流式细胞仪细胞表面抗原鉴定。
1 \. d7 e% T4 n3 N" n+ N" g3 q建议你的呈脂诱导时间长一些，１０ｄ不够吧。9 P+ q" p( ^2 M# [# @: G8 C
以上仅是参考，不知你诱导液成分。

李兰兰

回复 shagu 的帖子& `/ g9 ^6 ^" }$ F+ e

- G+ f% `( P; {5 C# T4 ?, |另外染液油红O一定要过滤或者离心，不然染液的絮状物影响图片质量。6 d; }1 f- |) d! d- ?& v
你做间充质干细胞哪方面的实验啊？

shagu

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非常感谢您！这段时间忙执业医，就没回家看看，细胞再次做起！我的诱导液买的现成的，可以看看你的成脂诱导和成骨诱导图片吗？这是我的成骨诱导，应该成功了吧！

shagu

" p+ [) e4 k7 h# \1 }. f' V1 V2 G; {
9 s% |$ w& {3 ?" q2 m刚才图片没传上，

沁蓝之城

我现在成骨和成脂一直诱导不出来，很急。我用的是gibco的现成的诱导液，但效果很不理想

细胞海洋

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小公

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8 ~, W9 `, W0 H% M+ L: L; \0 ~0 u你好，我自己提取的间充质干细胞，需要进行分子标记物鉴定和诱导分化，很多问题请教你，1 分子鉴定的标记物，买的哪家的，具体单标的荧光如何选择的？ 2 诱导分化是自己配置的诱导液吗？ 谢谢

luyue6453

回复 李兰兰 的帖子7 ?6 o( ^; {' @3 w; k

  B  P) M- R0 Q) \能发两张您的成骨成脂的诱导成功图片吗？我现在正在做，想参考一下