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楼主: 李兰兰
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骨髓间充质干细胞成脂、成骨诱导分化   [复制链接]

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发表于 2013-6-30 10:48 |只看该作者
本帖最后由 shagu 于 2013-6-30 10:56 编辑 " |$ F; |9 w5 Y* f% A
; t4 W& q3 k- X
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' f' U6 ]9 `: U: s- W4 O4 U! `, e5 K( ]! e( e: k
密度大概1x10的6次方,成脂是10天时染色,成脂失败,成骨现在第17天,细胞有铺路石的样子,细胞间错综交叉呈网状,但看不到肉眼的钙化结节,问一下楼主:
( ?6 [% e9 b8 d% t9 f7 I- L$ x1、染色得适宜时间是?, E+ f% w4 i( [; v6 r2 q
2、用ALP染过色的细胞还可以用茜素红染色吗?必须的用ALP染色才有说服力吗?
4 J" t- J3 h2 H# g3、1xPBS可以用普通PBS即一袋配2000ml的代替吗?
: B6 U9 b6 E* w5 q# t% j- V9 ]( w            哈哈,谢谢楼主慷慨解困!
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发表于 2013-6-30 23:33 |只看该作者
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9 M+ ~! l" J$ r/ s8 w0 }7 a0 u
+ S2 B' q6 s) n! _5 V4 x我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴,成骨的话不感觉是细胞上沉积了一些钙盐。成骨我是直接用的茜素红染色的,成脂用的油红O染色的。
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发表于 2013-6-30 23:43 |只看该作者
回复 shagu 的帖子. v$ H* d( F, V& F  ~

; g) }8 y$ O3 F/ G( t9 _7 O我大概是2×10^5/孔密度接种于6孔培养板,约80%融合时开始诱导,成脂的时候可以明显看到很多圆圆的脂滴,成骨的话感觉是细胞上沉积了一些钙盐,但不是很明显。如果你的细胞活力还可以的话,建议可以多诱导几天,这样染色图片更漂亮。成骨我是直接用的茜素红染色的,成脂用的油红O染色的。' @+ ~: b- U# q$ H! K% V
另外PBS我实验室用的是配好的呈瓶的,自己没有配。1 V# d2 R: j: q" z* W! G3 J
我当时预实验是成骨、呈脂分别诱导了三个皿,这样便于观察,可以不同的诱导时间染色,不然染色失败的话,时间等的太久。结果染色图片还是蛮漂亮的。
  }9 u  V0 S: ^4 M$ P6 h% C2 v不知道你的间充质干细胞有没有做过鉴定呢?我的做了流式细胞仪细胞表面抗原鉴定。
1 \. d7 e% T4 n3 N" n+ N" g3 q建议你的呈脂诱导时间长一些,10d不够吧。9 P+ q" p( ^2 M# [# @: G8 C
以上仅是参考,不知你诱导液成分。
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发表于 2013-6-30 23:47 |只看该作者
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回复 shagu 的帖子& `/ g9 ^6 ^" }$ F+ e

- G+ f% `( P; {5 C# T4 ?, |另外染液油红O一定要过滤或者离心,不然染液的絮状物影响图片质量。6 d; }1 f- |) d! d- ?& v
你做间充质干细胞哪方面的实验啊?
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发表于 2013-7-15 17:08 |只看该作者
本帖最后由 shagu 于 2013-7-15 17:15 编辑
6 p' }. k; c8 J- \! J! Y! x* Z9 M* k( m' Z4 V! v4 V
回复 李兰兰 的帖子
% W! p$ X3 }8 x9 s$ E; z. q) d$ Z1 W- ^
非常感谢您!这段时间忙执业医,就没回家看看,细胞再次做起!我的诱导液买的现成的,可以看看你的成脂诱导和成骨诱导图片吗?这是我的成骨诱导,应该成功了吧!
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发表于 2013-7-15 17:30 |只看该作者
本帖最后由 shagu 于 2013-7-15 17:34 编辑
" p+ [) e4 k7 h# \1 }. f' V1 V2 G; {
9 s% |$ w& {3 ?" q2 m刚才图片没传上,
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发表于 2013-7-17 17:02 |只看该作者
我现在成骨和成脂一直诱导不出来,很急。我用的是gibco的现成的诱导液,但效果很不理想

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小小研究员

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发表于 2013-7-19 00:22 |只看该作者
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发表于 2013-7-25 16:24 |只看该作者
回复 李兰兰 的帖子6 X( N! g" |  }3 S* ?1 w

8 ~, W9 `, W0 H% M+ L: L; \0 ~0 u你好,我自己提取的间充质干细胞,需要进行分子标记物鉴定和诱导分化,很多问题请教你,1 分子鉴定的标记物,买的哪家的,具体单标的荧光如何选择的? 2 诱导分化是自己配置的诱导液吗? 谢谢
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金话筒 优秀会员 美女研究员 积极份子

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发表于 2014-5-31 10:42 |只看该作者
回复 李兰兰 的帖子7 ?6 o( ^; {' @3 w; k

  B  P) M- R0 Q) \能发两张您的成骨成脂的诱导成功图片吗?我现在正在做,想参考一下
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