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间充质干细胞的成骨诱导鉴定,附图  

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发表于 2013-6-19 19:42 |显示全部帖子
本帖最后由 light_blue 于 2013-6-19 19:44 编辑
4 s  U( L* x, A1 Y2 J7 K. H
7 G+ F& |" M# _+ X: E; Q4 p* N6 H刚做的成骨诱导细胞茜素红染色鉴定,诱导使用的gibco的试剂盒。12孔板接种,细胞接种密度每孔2万,90%融合诱导,每3天更换诱导液。! z- d0 r. J$ F: g8 u. o
试剂盒说明是在21天做成骨鉴定,但本人共做了5孔,其中4孔第7天的时候脱壁。没办法,担心最后一孔也出现这个问题,只能提前做鉴定。
& L. T8 h; Q: h. c  O# R+ H% g以下是鉴定图片,请大家帮忙看看符不符合要求:& W" C. r2 C2 ~; q: Q3 C/ H
, V5 O+ W1 o' g  K( k
细胞茜素红染色过程:
! J0 _. h# O' k' ]1)2g+100ml双蒸水,PH4.1,滤器过滤。0 e+ b# v6 u0 c8 x* A- j- u
2)弃诱导液,PBS冲洗3次) N! }  l5 ^) J) E, m
3)4%多聚甲醛固定30分钟
9 M" b. f% S, N- k) t% l4)弃液,PBS冲洗3次
4 `6 h/ ]1 i$ L5 P' j& H5)加染液2分钟
. S6 c2 e# b! w' f+ L2 V- V6)弃液,PBS冲洗3次
1 ^' u" G8 G( G. A) V: Z! ]( j0 `4 Z% q  s
细胞中途脱壁的原因一直不明,按照说明做的啊。
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金话筒 优秀会员

发表于 2013-6-19 20:18 |显示全部帖子
不要用多聚甲醛固定,这个是做成脂诱导时的固定液,用95%的乙醇
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发表于 2013-6-19 20:33 |显示全部帖子
希瑞干细胞
回复 wangzhiqi86 的帖子
# W7 K6 z) i8 x, x9 T. f2 j0 [3 ~8 v, ]
诱导试剂盒的说明书上用的多聚甲醛,我用95%酒精固定过成脂分化的,然后没做出来结果..
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金话筒 优秀会员

发表于 2013-6-19 20:46 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
回复 light_blue 的帖子/ `3 y+ L: \! y, v9 k$ Q- j
3 O% r3 x" r3 p) X5 K+ |$ S
书是死的,人是活的,做不出来,即使说明书告诉你的也没用啊
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发表于 2013-6-19 20:56 |显示全部帖子
回复 wangzhiqi86 的帖子
- j  i  d* g  I; |4 \. V! b1 m7 c
8 s; P6 P7 |5 U! d5 l好的,我再做一组试试看,主要是脱壁问题比较棘手,等不到21天。

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发表于 2013-6-20 09:52 |显示全部帖子
本帖最后由 素心无痕 于 2013-6-20 09:56 编辑 ! N3 w% p7 R7 v5 v
* l( o/ l/ h& o* k# u/ X0 v  C
同意wangzhiqi86的意见,早几年也做过间充质细胞的成骨诱导,用的是95%酒精,具体方法是:茜素红染色检测矿化结节:吸去孔中培养液,PBS洗2次,加95%酒精固定10min;弃去酒精,PBS洗2次,加入0.1%茜素红染液,染色30min。当时还有一些图片,当时手生,欢迎批评指正!" \) B& X( [: `) c7 r3 v, O9 u1 V
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发表于 2013-6-20 23:09 |显示全部帖子
回复 素心无痕 的帖子
  c  G0 e9 x" h8 y
3 w# l/ r7 o) B9 c谢谢提出的意见,下次我用95%酒精试试。我的这几组图片里面红色的是钙节节吗,这回诱导时间不够只有7天。
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发表于 2013-6-20 23:16 |显示全部帖子
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2 l0 h7 z6 }" K- f6 k+ l3 L
; w: }( J1 p# ?我准备重新配置成骨诱导液,把血清比例调低一点,请问你的诱导液是自己配的吗,用的什么公司的试剂?
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发表于 2013-6-21 09:51 |显示全部帖子
回复 light_blue 的帖子- ~6 L6 P. ]) W) w7 N. v; z5 x
  F7 \- E2 L7 s3 {5 T# v
兄弟,如果你的经费比较充裕,可以考虑购买成品诱导液;如果想锻炼一下自己可以自己配。每个城市的代理商都不一样,我们实验室是统一订购,具体的厂商建议你可以网上查询。希望对你有帮助。
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发表于 2013-6-21 10:57 |显示全部帖子
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8 C; t+ N3 ]% K! u- X7 y' Y+ N/ e' }( @+ i
现在用的成品试剂盒,做个鉴定还行,后期实验用的比较多,准备先自己配个试试。你有没有遇到诱导过程中细胞长成一片,然后脱壁的问题呢?
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