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间充质干细胞的成骨诱导鉴定,附图  

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发表于 2013-6-19 19:42 |显示全部帖子
本帖最后由 light_blue 于 2013-6-19 19:44 编辑
' R; K$ ~6 ~( s4 ]9 d/ i3 f
7 M( {& z5 v8 G6 T6 D, ]刚做的成骨诱导细胞茜素红染色鉴定,诱导使用的gibco的试剂盒。12孔板接种,细胞接种密度每孔2万,90%融合诱导,每3天更换诱导液。6 F# r: i4 p% O7 y: r; v
试剂盒说明是在21天做成骨鉴定,但本人共做了5孔,其中4孔第7天的时候脱壁。没办法,担心最后一孔也出现这个问题,只能提前做鉴定。! H; D6 L0 k# s8 Q5 N& I
以下是鉴定图片,请大家帮忙看看符不符合要求:
$ f; N: M! ~5 A1 x
9 G- J' \2 Y& I7 a) n细胞茜素红染色过程:- K/ S) {$ i2 O4 W1 i; Y8 a: F
1)2g+100ml双蒸水,PH4.1,滤器过滤。
: A( e3 n8 |" E* D6 n, M1 F2)弃诱导液,PBS冲洗3次, q+ k7 k- ?6 T
3)4%多聚甲醛固定30分钟& w; \3 Q/ f, Y$ X# D
4)弃液,PBS冲洗3次
0 ?" J6 F# |+ Q! m$ L& O5)加染液2分钟
4 f& m, W+ L5 j& `  q2 a- q0 u, r6)弃液,PBS冲洗3次
; {1 T  d. E7 n: ]' c2 f7 y. x( Q/ t3 l7 E( n
细胞中途脱壁的原因一直不明,按照说明做的啊。
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发表于 2013-6-19 20:18 |显示全部帖子
不要用多聚甲醛固定,这个是做成脂诱导时的固定液,用95%的乙醇
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发表于 2013-6-19 20:33 |显示全部帖子
希瑞干细胞
回复 wangzhiqi86 的帖子2 y: N9 F  r1 A
+ K# {& T2 r6 X5 M
诱导试剂盒的说明书上用的多聚甲醛,我用95%酒精固定过成脂分化的,然后没做出来结果..
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发表于 2013-6-19 20:46 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
回复 light_blue 的帖子) @% C* d. S- E; q
) F, X5 P4 l# U1 k, q3 }8 q3 k
书是死的,人是活的,做不出来,即使说明书告诉你的也没用啊
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发表于 2013-6-19 20:56 |显示全部帖子
回复 wangzhiqi86 的帖子0 }. Y5 L1 f. G

- w# A7 p3 b  q$ Z- u好的,我再做一组试试看,主要是脱壁问题比较棘手,等不到21天。

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发表于 2013-6-20 09:52 |显示全部帖子
本帖最后由 素心无痕 于 2013-6-20 09:56 编辑 3 G) d3 |3 L2 \+ M7 ~/ W

3 H$ ~# W5 _5 h! O8 y: K3 W8 Z同意wangzhiqi86的意见,早几年也做过间充质细胞的成骨诱导,用的是95%酒精,具体方法是:茜素红染色检测矿化结节:吸去孔中培养液,PBS洗2次,加95%酒精固定10min;弃去酒精,PBS洗2次,加入0.1%茜素红染液,染色30min。当时还有一些图片,当时手生,欢迎批评指正!$ _4 [2 H6 S0 n) h' Q' ~
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发表于 2013-6-20 23:09 |显示全部帖子
回复 素心无痕 的帖子& L) G5 S; ]  I- o! ~0 p
, b% B1 Q0 a) \% q2 m( c
谢谢提出的意见,下次我用95%酒精试试。我的这几组图片里面红色的是钙节节吗,这回诱导时间不够只有7天。
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发表于 2013-6-20 23:16 |显示全部帖子
回复 素心无痕 的帖子! `, @4 q$ G- S3 Q* U

; W* ~4 T$ U; h! x* }% ^我准备重新配置成骨诱导液,把血清比例调低一点,请问你的诱导液是自己配的吗,用的什么公司的试剂?
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发表于 2013-6-21 09:51 |显示全部帖子
回复 light_blue 的帖子; b! n/ ~! D: k. ^0 Y" m
4 S$ V0 b, B( B* k
兄弟,如果你的经费比较充裕,可以考虑购买成品诱导液;如果想锻炼一下自己可以自己配。每个城市的代理商都不一样,我们实验室是统一订购,具体的厂商建议你可以网上查询。希望对你有帮助。
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发表于 2013-6-21 10:57 |显示全部帖子
回复 素心无痕 的帖子* v6 b. [( a2 y& S, q

' {5 A7 f% e7 K1 F现在用的成品试剂盒,做个鉴定还行,后期实验用的比较多,准备先自己配个试试。你有没有遇到诱导过程中细胞长成一片,然后脱壁的问题呢?
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