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间充质干细胞的成骨诱导鉴定,附图  

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发表于 2013-6-19 19:42 |显示全部帖子
本帖最后由 light_blue 于 2013-6-19 19:44 编辑
8 V9 h  M7 ]) ?6 P1 e/ E4 `
% \5 s9 x! B6 v8 [/ z9 [; G刚做的成骨诱导细胞茜素红染色鉴定,诱导使用的gibco的试剂盒。12孔板接种,细胞接种密度每孔2万,90%融合诱导,每3天更换诱导液。
. F( h4 M2 B) S4 G试剂盒说明是在21天做成骨鉴定,但本人共做了5孔,其中4孔第7天的时候脱壁。没办法,担心最后一孔也出现这个问题,只能提前做鉴定。
; l7 E1 A6 l$ a4 p. U以下是鉴定图片,请大家帮忙看看符不符合要求:
7 Y0 n1 r) E6 F6 v8 d9 X# V: l# V, K: J. J3 J
细胞茜素红染色过程:
: `  r( P& Q, B% F1)2g+100ml双蒸水,PH4.1,滤器过滤。) ~+ }8 s6 `% y
2)弃诱导液,PBS冲洗3次
: a1 M% v6 v/ s' T4 D0 ]0 b5 ~3)4%多聚甲醛固定30分钟& V6 K; A4 `0 b9 H; C6 b' P
4)弃液,PBS冲洗3次  Q5 ]! z! m2 q$ P* `( ^; E
5)加染液2分钟
& j- m4 s8 v$ F9 O6)弃液,PBS冲洗3次
5 |8 C  Q) ]$ i" p/ }+ T6 A/ w7 u
' A  M1 P0 t* j+ V细胞中途脱壁的原因一直不明,按照说明做的啊。
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金话筒 优秀会员

发表于 2013-6-19 20:18 |显示全部帖子
不要用多聚甲醛固定,这个是做成脂诱导时的固定液,用95%的乙醇
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发表于 2013-6-19 20:33 |显示全部帖子
希瑞干细胞
回复 wangzhiqi86 的帖子
' L+ o% J0 d' ?  u, I
! a+ t! O  |5 R: x  D% p诱导试剂盒的说明书上用的多聚甲醛,我用95%酒精固定过成脂分化的,然后没做出来结果..
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金话筒 优秀会员

发表于 2013-6-19 20:46 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
回复 light_blue 的帖子  E1 |* f7 ^* e6 v- Z: S

2 ^3 G1 B- W  q$ r, `( N书是死的,人是活的,做不出来,即使说明书告诉你的也没用啊
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发表于 2013-6-19 20:56 |显示全部帖子
回复 wangzhiqi86 的帖子4 ~5 Y2 n; k# m( k
' k; V7 d5 v* f
好的,我再做一组试试看,主要是脱壁问题比较棘手,等不到21天。

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发表于 2013-6-20 09:52 |显示全部帖子
本帖最后由 素心无痕 于 2013-6-20 09:56 编辑
. m+ m/ M- p5 b( ^' j6 q/ @6 S% \! z6 Z( v$ b; F+ F" U4 H
同意wangzhiqi86的意见,早几年也做过间充质细胞的成骨诱导,用的是95%酒精,具体方法是:茜素红染色检测矿化结节:吸去孔中培养液,PBS洗2次,加95%酒精固定10min;弃去酒精,PBS洗2次,加入0.1%茜素红染液,染色30min。当时还有一些图片,当时手生,欢迎批评指正!
7 e# P' Z% R3 V7 V1 j
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发表于 2013-6-20 23:09 |显示全部帖子
回复 素心无痕 的帖子' c* X1 X4 ~6 l& s/ |( G2 Q

; g9 P! h1 ~7 _$ p0 a7 D' E) j谢谢提出的意见,下次我用95%酒精试试。我的这几组图片里面红色的是钙节节吗,这回诱导时间不够只有7天。
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发表于 2013-6-20 23:16 |显示全部帖子
回复 素心无痕 的帖子
9 r9 b! W1 k$ `: G
$ O% @; g7 H) M6 B0 |& V我准备重新配置成骨诱导液,把血清比例调低一点,请问你的诱导液是自己配的吗,用的什么公司的试剂?
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发表于 2013-6-21 09:51 |显示全部帖子
回复 light_blue 的帖子
! g/ u* J3 t0 w2 g1 Q# G  T1 N/ d, u4 o3 \. [/ f8 c! U5 N3 f; k
兄弟,如果你的经费比较充裕,可以考虑购买成品诱导液;如果想锻炼一下自己可以自己配。每个城市的代理商都不一样,我们实验室是统一订购,具体的厂商建议你可以网上查询。希望对你有帮助。
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发表于 2013-6-21 10:57 |显示全部帖子
回复 素心无痕 的帖子* F+ E2 _& D3 @0 g* ?
, L( o) |* ]2 t# x. A' r' q
现在用的成品试剂盒,做个鉴定还行,后期实验用的比较多,准备先自己配个试试。你有没有遇到诱导过程中细胞长成一片,然后脱壁的问题呢?
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