请问这是什么污染？如何挽救？

20111109

回复 lmh_yixue 的帖子% \$ A, ]  q1 D

2 Q5 ^8 B: C# w- h1 {' g4 R嗯 伺候细胞这种事情都能游刃有余的话。。。以后伺候婆婆一定不在话下了~~

qiushuiwuhen

强烈建议废弃，我再4、5曾有两次污染，现在想想都是触目惊心，当时很可惜细胞，用还有高浓度的双抗去挽救，结果还是不行，并且恐怖的是可能会污染培养箱的其他细胞，所以建议你扔掉，全当是一次教训，再牛的人，谁不是从当年的污染走来的，加油

heming

应该不会是支原体污染，支原体污染在40X10的镜下是看不见的，必须做相关的检查才能知道。这个估计是什么杆菌污染，没得救了，重新找新的细胞吧。

deshenglll

像杆菌啊。这么多，估计细胞没啥用了。之前我们也尝试过补救，可以是到冻存的时候就污染了。从新做吧，前期的消毒处理很重要。祝你好运。

bioaizhiying

lmh_yixue 发表于 2013-7-30 13:21 & E0 ^  v7 f- ^
请问这是什么污染？怎么挽救细胞？是支原体吗？用什么可以杀死而不影响细胞

$ H; E) i$ {! c* e1 r, H; A
可以肯定的说不是支原体污染。这种污染我遇到过，和你描述一致。曾用pbs双抗洗过4遍后换液，并加2倍双抗接着培养过，不过仍抑制不了其增殖。
/ A9 i, X. q- T8 \6 a感觉像“虫子”，你这种情况，40倍估计可以看见培养液表面密密麻麻漂着这种“虫子”。
6 b. D9 U( l; H0 W) i6 q$ b$ p试过加1倍培养液体积的75%乙醇可以很快挂掉这些“虫子”，但仍挽救不了。索性见到这种情况直接扔掉。$ E9 s- @/ z* T. Q4 f, k, Q% `
个人感觉细胞传代过多或者培养条件变化，发生这种污染的概率比较大。

lmh_yixue

回复 qiushuiwuhen 的帖子2 f6 A+ m2 m# f8 `

' w- d- |1 X8 B谢谢！！！

lmh_yixue

回复 heming 的帖子# X2 i' ^) J3 K: E% w* d, o

# ?' U% w8 x, g谢谢！！！

lmh_yixue

回复 deshenglll 的帖子7 `. G0 t5 S: S* q- O8 D
/ o5 O. \# ]1 D: I& x( ^% |& z8 c
谢谢！！！

lmh_yixue

回复 bioaizhiying 的帖子
" l, Q" X2 a) s; w8 o7 P* W. a( v$ {9 f0 E9 x, n* K4 P4 x
谢谢！！( ?1 X5 W$ m% |9 p. d
这些虫子看着很可怕，但是细胞怎么还一直活着，状态也不错。我把外面没有消毒的离心管放入生理盐水后再将生理盐水培养，今天看到生理盐水里也有这个虫子。我想可能就是消毒问题了，活着操作过程中碰到了外界物。9 H8 W# L8 ~0 P; c" z# f
我们做诱导实验，这细胞在外面养了10天没传代，好不容易诱导出来了却污染了。

zpzp0312

你用PBS彻底清洗培养物若干次，一定要洗的自认为很干净，然后消化成单细胞。随后拿一个96孔板加满培养基。将单细胞悬液吸取少量放在第一个孔里，混匀。再从第一个孔吸取少量转移进入第二个孔，依次稀释。- X5 G* ^) a/ k2 @0 l7 a% x) Y8 h
最后，你可能会获得无污染的细胞培养物。
2 L4 x( f( Y3 H- a" ]另一个方法就是将细胞消化后，稀释到较低的细胞密度，使用显微操作仪收集单细胞并转移进入新的培养皿。一定要在最高倍数进行操作。拉针要尽可能长，前端过度要缓，尽量多吸取单细胞并避免吸入细菌。