如何选择恰当的细胞分选柱

miltenyi

* Z: K9 G3 x' q2 Q9 _
# c7 ~) N# ]+ J8 I' y8 e
美天旎的分选柱分几类，如MS、LS、LD级autoMACS column 等，那么，这些有什么区别呢，您在实验中又该如何去选择适合您的分选柱呢？
% ?5 @3 z% U# E) N$ B/ w
- N8 Z- T2 t/ S1 U5 r首先，让我们来认识一下分选柱：' R, G0 `: B' @, H4 a

9 [2 N$ U5 J9 h2 n- ~美天旎的分选柱（Column）是MACS技术的核心，其特点如下：
! s$ _/ A4 t% J3 e' o' N

• 填充有不同规格的铁珠，可分选或者去除10^7-10^10细胞；
  7 u- U- ~3 Z! ~
•     表面亲水包被，不损伤细胞，同时保证流速；
  * Q3 ~% G' J2 M4 l  S
•     可以将磁场放大1000-10000倍，因此只需极少的细胞表位被识别即可被磁场捕获，从而为后续实验预留足够抗原表位，如磁珠分选后的细胞无需切除磁珠即可直接染流式抗体，而不受影响。
  ' \1 t9 t2 u1 v5 ?) f

6 f9 L2 Z/ q. k% X7 k; w
我们知道，美天旎的MACS分选策略有阳性分选、去除分选，那我们就按两种分选策略来分析如何选择恰当的分选柱：4 ~. V; f- E8 r  c) }7 g
- r# L* f- s, l" ^$ g
一、阳性分选
9 `3 i. p: s9 I8 D( |" b1、要分选的细胞数量：; I1 N" G5 ?+ `! {4 E" V! x
8 R: o3 |3 R0 D
如下图所示：MS柱容纳的最大细胞上样量是2×10^8细胞（既包含阳性细胞又包含阴性细胞），而其能捕获的阳性细胞最多是10^7。1 {7 z6 D' d0 V4 L7 M
" F/ c3 ?' D, d$ {/ d
如何选择恰当的细胞分选柱
; f  h  D# z7 `& ?4 E' U* ?9 P2 s5 {3 j( y2 A" s/ o

4 i0 F. x- N& o; q) N8 w# t2 v2、目的细胞是常见细胞还是稀有细胞, A, T3 Q, z! H3 L! m* w# c; [6 O
# ]* n5 {& B' v0 P
为了在分选稀有细胞（表达频率〈5%）时得到较更高的纯度，您可以使用两个分选柱：用一根分选柱进行一次分选后，阳性成份再过一次新的分选柱。9 o/ {6 Z3 M, a  u7 x6 F2 R$ I

7 L' y) |* g1 e+ N( p9 F3、大体积的细胞8 w5 R, K  _: B& W- T" `$ w
  V  T: ], i' q. ^
另外，如果您要分选的目的细胞是体积较大的特殊细胞，如原生动物细胞、人皮肤郎罕式细胞、鼻咽癌细胞、心肌细胞等，那推荐您使用Large cell column。因为大细胞柱的铁珠间隙足够大，容许这些特殊的大体积细胞顺利通过。1 Y8 Z& `  {) a' ]! j, O& d

% n- i7 A- V0 X- R7 \. Q# t6 {二、去除分选
1 S: A+ P9 z7 z3 L" L* k/ c0 y6 T$ e0 ~  |& t6 m
去除分选中需要考虑以下几个因素：
. ~! q; s! W& ~' t: U7 b9 k, u. d. y: _4 A1 N1 p3 _
1 您使用MACS isolation kits 或MACS microbeads吗？
4 w+ c" l& F0 W
; k, L  c9 C0 a0 M  X) J2 抗原表达强还是弱呢？
$ B$ g, {# a5 K1 B8 n2 f7 w( v
2 v6 L1 e8 j+ Y/ q; k3 您需要更高的纯度还是回收率呢？
' @# F- w' L1 M0 K
- g; f% ~' [% f6 s4 您需要分选多少细胞？
; k& t4 y, ~" A4 Q
! b# B0 M, @6 X根据这几个因素，您可以按下图的标识来选择合适的去除分选柱。9 ^, Q6 t: L* [: `: l
# _" s: o' h5 B7 r3 N1 @

6 t0 q# w$ b! h2 W3 T
* w+ g' C0 r# c9 [6 l以上，您知道如何选择分选柱了吗？6 y& i+ A+ q% q
" V) g7 U  P! o" D7 a
如有疑问，您可以拨打800-820-2606
4 \: P% B/ Q$ y) |
0 [9 m5 {- p* u7 p0 U9 o' b* q或者发邮件macs@miltenyibiotec.com.cn 咨询。

yuanshenyewu

MS用的还是多一点