间充质干细胞消化不下来

569981454

浓度太大对细胞损伤太大，胰酶也有分类的，0.125%就行了！

漂泊的风

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浓度低了根本就下不来，没办法才提高浓度的

xuyang0317

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: u2 e/ O* c/ F! r! R胰酶的浓度在0.25%或者0.125%浓度即可，我们是消化2分钟，然后用手（培养瓶）拍打侧壁再用移液管吹洗培养瓶的底部，在消化之前，会用PBS冲洗培养瓶2次的，洗去之前含有血清的培养液，因为血清对胰酶有终止消化的作用的，胰酶是否有问题你要确认，再就是你的操作问题，还有消化的方式，实在不行，你可以采用孵箱消化。
4 A) v0 ?. E* E胰酶会有适宜的消化温度，胰酶最适宜的消化温度是40℃，但是我们会综合自己的实际情况和经验来考虑采用适合自己操作的温度，像我们就是一般在消化前几分钟，就将胰酶在室内放置一段时间，胰酶的保存温度是常温冰箱，大概是4℃，而我们操作时胰酶的温度大概是在20℃左右。

569981454

消化过程在培养箱内进行，然后就是用手轻拍瓶壁，还消化不下来的话，再用吸管反复吹打几下。另外还要看操作过程是否有问题，胰酶配置最好参考说明书，总之各个环节都要注意的。

light_blue

以前做过小鼠的MSC，的确很难消化，这个好像和鼠种有关系，建议用没有白化的小灰鼠试一试。我做的最好的一次也只传到第三代，现在改做大鼠的MSC了，消化没有问题。实在不行用细胞刮刀试一试，但要在培养皿里面养。

漂泊的风

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好的，我知道了，谢谢啊，我以前养的大鼠的是比较好消化，小鼠的就不行了

ganggangtry100

建议：! i  k/ V0 G5 x" E
1、胰酶在消化前，先放到37度预热& |: d0 s1 C' D2 q( D
2、细胞显微镜观察后，及时放回培养箱中，消化时再取出，保障消化时的温度
8 r/ {3 H* ?% Y7 t3 t9 ~/ z* D3、MSC细胞，在分离的时候，特别是脐带来源的MSC，经常会含有内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞等一些贴壁细胞，也呈梭形，用胰酶消化，能对MSC进行纯化。" s% B7 `3 |+ r3 I! k
4、消化前用PBS好好清洗细胞，0.5%胰酶对细胞伤害挺大，建议最好用0.25%以下的。/ P) r( |1 k* @' U
5、调整细胞接种浓度，MSC挺好养的，希望你能成功。

ytumuyangren

我们用的都是自己配置的0.25%胰酶，用的时候都要稀释2-4倍，而且细胞很容易就消化下来。如果楼主的部分细胞很难消化，那就不是间充质细胞，很可能是成纤维细胞，建议弃之。

shagu

我用配好的0.25%含EDTA的胰酶，消化大鼠MSC，以前好消化，这次怎么着都下不来，所以只能消化俩次，自己分析原因：1.胰酶没预热，直接从冰箱拿出来就用。2.细胞密度太大，胰酶与细胞接触不充分。3.可能是其他杂细胞难消化，准备鉴定后再看。

zijunqin

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8 ?7 u* N, z' }4 v0 N9 S+ Y) Y' _4 ~9 D! K+ Q
我培养293T也遇到类似情况，购买的成批胰酶消化不动，那是极其难以理解的 ! D; U9 I( X% @$ `! M( z3 q0 D2 Q
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不过间接证据 认为是感染了支原体 细胞已经死了