求助，脐带间充质干细胞培养中逐渐死亡

沙漠狐o0

为什么不用0.25%胰酶？消化1~3分钟就可以...

听不到

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- T0 D7 e6 S4 r; ]) M恩，貌似确实是我的胰酶有问题，换用了师姐的0.25%的胰酶，1分多就消化下来了

倒腾细胞

初来乍到 向前辈们学习

星空雾雨

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终止消化是培养基和胰酶结合 还是里面的血清和胰酶结合 然后胰酶停止对细胞的作用

weijunning

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消化不下来的细胞就不是间充质干细胞了。纯的间充质干细胞很好消化的，0.05%胰酶室温3min就可以完全消化。

听不到

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5 m3 @9 Y& j- s' ]+ }. i0 a  O* y+ c) `8 D
是血清阻止了胰酶的作用，由于血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂（网上查的...不过是血清起终止作用这个是确定的）

wuzhongqi

你在倒掉培养液后，用生理盐水洗培养瓶没有？若是没洗的话，残留培养液会终止部分胰酶的消化，你就很难消化掉细胞。若是培养细胞中有胰酶，细胞很容易分化。

星空雾雨

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3 h2 F& g( o, O& r9 j
* e# \: I; `# t5 [( H% W' [我们用的无血清培养基  加入血清代替品 终止消化的话直接加的基础培养基 这样效果会好吗？还有 你终止胰酶用的血清是哪个牌子的 需要稀释吗  然后每瓶加多少？

听不到

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胰酶会导致细胞分化吗？为什么？

听不到

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基础培养基是含有血清代替品的培养基吗？我也不知道行不行，我用的都是直接加血清的培养基。终止胰酶的话我一般是加与胰酶等量的培养基（含10%血清），然后离心去除胰酶。如果胰酶不与EDTA混合的话，我甚至整过直接加培养基来终止进而吹打然后分瓶培养的，不过那样加的培养基就挺多了。不过看有人说胰酶对干细胞不好，尽量还是去除吧