cas9 gRNA设计原则

shane

麻烦能不能把zhangfeng文章发给我啊，谢了！

yuanyecat

我告诉你，sgRNA有几个在线设计网站) E/ \$ I* ^% R
第一个是 Zhangfeng lab：http://crispr.mit.edu/；
1 ~% C6 o; j6 F, s+ R6 g1 F) R第二个是 Jack Lin's lab CRISPR/Cas9 gRNA finder:http://spot.colorado.edu/~slin/cas9.html；
( `% s* k: {# U; {& L) n8 C. _第三个是 Boutros lab: http://www.e-crisp.org/E-CRISP/; 9 n& b, o3 w$ o7 |
第四个 Zinc Finger Consortium:http://zifit.partners.org/ZiFiT/ChoiceMenu.aspx
0 s9 ?; L8 }( ]3 J/ k3 r% Z' w' @你可以到上面网站去找，可以看到你想要的东西，另外有些公司也卖这些引物。你在网上一搜索就知道了

妖妖空

这东西本来就很容易Off Target，我们一直用Zhang Feng实验室那个网站设计的，你说的没活性不知道是什么意思，要是想要Knockdown的话，那种概率非常非常小，做mutant还是很好用的。本来Cas9就是用来做mutant的，而且很多基因Knockdown以后是没什么表型的，但是mutant表型特别明显，所以Cas9才会很Powerful，才会有现在突然这么多的文章，其实好多都是以前实验室knockdown以后没表型，用Cas9一做，效果就特别好。我们一般都是设计以后先在细胞里面做实验，如果Work的话，然后才会去injection。对了，现在还有很多优化的方案，你可以查查看，而且公司都有卖。祝你好运！

奋斗的时光

张峰实验室的挺好的呀，我们师兄就照着做的。但是有个问题，有些行就行，不行就不行的，运气好的话一次就成功了。