PBMC提取

Andyhigh

- d. s! V' Y% Z& M. Y7 B7 q

zhrt 发表于 2014-4-2 08:08 0 B; Z% N2 @. P3 t: ~
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3 p4 X, N$ t7 j4 k% Y8 j你提取的淋巴细胞怎么这么黄？我说的是红细胞的上表层贴着红细胞的表面有絮状物，有 ...

; b! S3 b: {  P! _! N: b4 N# [( M
+ O$ M+ p8 F2 C3 o本来是红色的，手机拍完就变成这样了；今天又做了一次，再上传张图片瞧瞧。
* r$ A; H; F* r* d0 T( |! E" E
. W( T$ V8 n5 u) Z* {' {你说的可能是脾脏压碎后的组织碎片，细胞碎片，或者老化的淋巴细胞之类的混合物！

Andyhigh

4 D1 c1 p. l* y; B" n& _9 I7 |* S

490096812 发表于 2014-4-2 08:40 2 v: h: K" b; ~7 e
大神，你用的什么基质啊

+ h; F! P" c9 B2 K, N  [1 L
1 |6 j. E% s) J: u0 m( ]/ ZPercoll，最近看着有一篇文章说的PBMC的提取，不过用的不是这种基质！
" I1 \1 X/ g5 d* m) N3 J, A) u  |; u6 v# @
你可以参考本论坛的另一个帖子，有我的评论- y  ^8 p0 a" f* o* ]; s0 v
链接 http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... t-%D6%B8%BC%E2.html

Andyhigh

回复 momoenn 的帖子! L" h' n# x; J! u$ Q
8 K# f, s/ V9 \" ]& F
中间的白膜层是红细胞和淋巴细胞的混合物，此时还没有用红细胞裂解液裂解；& r0 n( `5 [  T: [. j
最上层的液体是自己加的1ml细胞培养液，根据自己的经验，这样离心的效果会更好点！！！2 y! Q+ Q8 c* s- {

Andyhigh

回复 aochongyu 的帖子$ F$ V7 q0 R7 ]9 O7 G
$ M! v+ {4 u4 ~$ t
自己加的1ml细胞培养液，这样做的目的是离心效果更好！

Andyhigh

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6 y& ]& `0 }. X" ~2 K. R  K9 d9 d0 q1 R6 j& c
用密度梯度离心，我知道的情况是离心机的升降加速度都必须为0啊，且此时离心为室温，不然后影响分离结果，而洗细胞 和操作时，最好在冰上操作，以保持细胞的活性！！！

momoenn

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# b& O6 y/ f; @7 v/ R0 O8 x( m; X  P9 b5 }0 Y2 N# k
升降加速度最小是1吧？但是那样太慢了，可以做实验找一个最合适的加速度的。

momoenn

回复 Andyhigh 的帖子4 t% g$ \; O) d1 m9 Z& J' K1 M  F+ X
& z* y6 `* ]# _' p) Z
奥，你用的percoll，那就不了解情况了。我们用ficoll，白膜层没有出现过红细胞呢

momoenn

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- ?* u1 o$ J, v* E9 D- c; _# h. V0 H
奥，这样啊。因为你用的percoll，不了解情况。我们用ficoll，白膜层没有混杂过红细胞。说一下我自己的分析哈，探讨一下，因为percoll和ficoll分离都是密度梯度离心法，红细胞和淋巴细胞密度不一样，不应该在同一层啊。

zhrt

回复 Andyhigh 的帖子; P# M( B6 X9 |: B
7 t- e4 C3 P% S; V
亲，我做的是用外周血培养cik啊

zhrt

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我们也是用ficoll白膜层