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对于酶来说,纯干粉状态应该不受低温影响。但是,通常酶都是溶解在储存缓冲液中。如果酶溶液结冰、反复冻融,必然会对酶造成结构损害、导致酶活力下降。因此,酶溶液能否在低温储存,关键在于其是否会冻结、结冰。
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$ {9 ?% P" L6 ^: ~+ |以常见的Promega Taq酶为例,其储存缓冲液B成分为:50%甘油,20mM Tris-HCl (pH8.0, 25℃),100mM KCl,0.1mM EDTA,1mM DTT,0.5% Tween® 20和0.5% NP-40。其说明书建议:长期储存(非频繁使用:每月1-2次):-70℃保存;每天或每周使用:-20℃保存。
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9 y) C' j3 p; S& G: ], q其中,50%甘油是很多酶储存缓冲液的主要成分,其冰点为-23.0℃。因此,建议的常规保存条件为-20℃。如果增加甘油浓度,当甘油浓度为66.7%时,冰点最低,为-46.5℃。当-70℃保存时,酶溶液已经冻结,如果频繁取用,必然因反复冻融导致酶活力下降。% v' M9 Q/ S0 g6 }! D7 \0 Q3 \0 F8 @+ [
; P/ j; \' b& Z& C' J/ m6 D因此,如果仅是在-80度短期放置,对于本应放置在-20度的试剂来说,影响不会太大;如果长期放置,且试剂密封不好,导致保存液浓度变化,进而改变试剂的冰点和冻融状态,影响可能就很大了。
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