CAR-T技术原理

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CAR-T细胞技术已经发展出3代，第1代CAR在胞内只有１个Ｔ细胞CD3ζ受体的信号区；在此基础上第2代增加了1个共刺激分子信号；第3代增加了2个共刺激分子信号。这些改进是基于一系列体
2 N9 h3 \6 {, n+ w/ ?$ u外和体内的实验和临床探索。目前，用于临床治疗研究的主要为第2代CART细胞技术，其中用来携带CAR的载体主要来源于逆转录病毒和慢病毒

wang255425

目前已经在开发的第四代CAR-T技术，包括整合表达免疫因子、整合共刺激因子配体等。

ET生物人

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) |' O3 c7 e5 d) Q7 n# B* `
西方国家的公司目前是应用于临床研究，国内的医院和公司也有啊

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CAR-T治疗--肿瘤靶向免疫治疗# k7 {  |1 W9 J* o) V
• CAR-T，全称 Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。
; A  n7 d1 ?* ~! J. o4 {  S3 ]• 通过将识别肿瘤相关抗原的抗体片段scFv和CD3胞内信号域 ITAM在体外进行基因重组，生成重组质粒，再在体外  W( [; y6 s# P$ I9 e8 T) v1 g8 e
转染到患者的T细胞，使患者T细胞表达能结合肿瘤抗原的受体。转染后经过纯化和大规模扩增后的T细胞，也即
, F: J' ?7 H+ [6 v+ e. oCAR-T细胞。CAR-T技术利用病毒载体将 CAR稳定表达在T细胞中，经过活化扩增，进入体内后能选择性识别并杀死肿瘤细胞。
/ ?& A- x" p8 h• 可以特异性地识别肿瘤相关抗原，使效应T细胞的靶向性、杀伤活性和持久性较常规应用的免疫细胞大幅提高，并可克服肿瘤局部免疫抑
; F* ~5 c3 V* o/ Y制微环境，从而打破宿主免疫耐受状态，杀灭肿瘤细胞。* [3 f9 g9 z2 e7 V) P0 e$ p: x
肿瘤相关抗原：tumor-associated antigen，TAA，是指一些肿瘤细胞表面糖蛋白或糖脂成分，它们在正常细胞上有微量表达，但在肿瘤细胞表达明显增高。7 h' L3 X7 d, E2 p0 L) G
ITAM：immuno receptor tyrosine-based activation motifs,免疫受体酪氨酸基序活化信号域' ]& q! w, A6 C3 d. H. D( A" @9 S, z

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CAR-T重组质粒的构建' z! W) o% e5 b4 U
1. 选择载体：腺病毒、慢病毒或其它能高效转染T细胞、表达嵌合抗原受体的载体。
/ S3 }+ [! h* G' v9 I% @2. 选取靶点：即肿瘤细胞特异性或相关的膜表面蛋白，如B淋巴细胞的CD19。
8 g6 }+ [8 F9 h+ z! \3. 获取特异性好、亲和力强的抗体的基因序列：这是CAR-T技术的关键和难点所在，4 D% F0 A- X- o
因为抗体的产生是免疫原作用下基因重排的表达产物，抗体基因编码序列在4 Y: _4 D% T7 B2 G$ s
NCBI的数据库是查不到的，而且在目前阶段是不可预测的。动物来源的抗体片0 F8 ]7 L& ]7 t# x+ q) ~
段在人体内可能会诱导针对此抗体片段的抗体，削弱长期的治疗效果，所以，往
) k9 V8 b5 b/ \: }; O往需要把动物来源的优质抗体人源化。
7 h7 s- h( L  J4. 构建重组质粒，感染T细胞：除抗体片段的编码基因，还要加入跨膜区、CD3胞) c4 r, L8 ^# R9 G3 X. }
内区、共同刺激因子以及白介素的编码序列。也是关键技术。2 F% G5 g; P% Z. p
5. 体外验证：嵌合抗原受体是否正确表达于T细胞表面；CAR-T细胞能否有效扩
/ v( `0 b3 _' M( b. D/ s增；CAR-T细胞是否能识别病人的肿瘤细胞并溶解肿瘤细胞；释放细胞因子的种
+ o% v5 a  @3 j0 ?5 f类和数量，等。' |5 `* R  k2 {5 l' U  N
体内验证：输入人肿瘤动物模型，活体检测CAR-T对肿瘤的消除作用。

maoyy2011

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