求助-小鼠颗粒细胞传代

aulenuyah

回复 moluxingke 的帖子% d! k  @1 k% B+ y; Q3 o; B

2 r% y. Z- y' _- l6 S如果轻轻刺的话，可以忽略的，而且你说的这两个细胞的原代比较难养，就算有也会很少的

moluxingke

回复 aulenuyah 的帖子2 A  D7 Y- Y& b- H! ~) N2 h
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谢谢，在培养的第一天没有把卵母细胞分离出来，然后等颗粒细胞贴壁了，第二天换液的时候才将卵母细胞移除，对颗粒细胞的生长有影响吗？' z) P* M. b* h6 a

aulenuyah

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7 k/ k; B4 S- ?2 T, A* K4 |" o卵母细胞和卵丘细胞共培养后，卵母细胞会成熟，而卵丘细胞会发生凋亡。所以最好别这样培养

apsuifeng

首先更正一下，这个叫法是不科学的，准确来讲应该叫卵丘细胞，这个细胞培养起来应该是比较简单的，如果与卵母细胞一同培养，有一个问题，培养基你应该用什么呢？我原来培养卵母细胞时会暂时不吹打，培养8个小时时吹打是比较好做的。不知是否解答了你的问题。

monk125

我看到过一篇science 说是颗粒细胞与卵母细胞共培养的 卵母细胞在有无颗粒细胞情况下都会自然成熟  另外，我见到别人养的颗粒细胞一般都是培养72小时就不养了 估计如果不加特殊培养条件 颗粒细胞会分化或者凋亡吧

monk125

这边实验室 是用体视镜取出卵母细胞 然后剩下的颗粒细胞再用淋巴细胞分离液收集 我用FSH CD45这两个标记测过纯度，大约收集的颗粒细胞纯度约80%-85%，会有淋巴细胞污染。我们也在想办法进一步提高颗粒细胞的纯度，如果你有更好的办法，欢迎指教。

moluxingke

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前段时间一直没有再做颗粒细胞培养，不过这几天又开始了，现在方法依然不太成熟，我现在打算这样做：首先是小鼠超排，然后刺破卵泡，先把COCs给拣出来，然后吹打使卵丘颗粒细胞散落下来，将这些颗粒细胞单独培养。对于刺破卵泡后残余的颗粒细胞和卵巢碎片混合物，我用细胞筛滤了一下，将那些大的卵巢碎片出去，剩下的大部分应该是颗粒细胞了，当然里面肯定混有其他的细胞类型，然后培养。然后将两组细胞比较一下，检测一些颗粒细胞markers的表达，看看差异有多大。
5 ?3 h, Y+ w: N+ N2 F& z只是还有一个疑问，壁层颗粒细胞和卵丘颗粒细胞在体外培养的情况下，它们的特性是否恢复一致？