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标题: 大鼠乳鼠神经干细胞取原代是胰酶消化还是机械吹打 [打印本页]

作者: 安毓菡 时间: 2014-10-22 19:15 标题: 大鼠乳鼠神经干细胞取原代是胰酶消化还是机械吹打

从乳鼠脑袋取原代时是用胰酶消化还是机械吹打后再接种呢？有没有哪位前辈亲自试验过两种方法的，传统方法是先消化后机械吹打，但是细胞损伤较大，也有人直接机械吹打分离的，不知道哪种办法更好啊~如果用胰酶一般用什么浓度要消化多久，终止消化又要用什么啊，担心血清终止可能导致神经干分化~求大家讨论指点！

作者: shaozi402 时间: 2014-10-24 08:40

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个人认为：1.直接机械吹打对细胞损伤超过消化对细胞的损伤；2.胰酶太强，不适合用于神经干细胞的消化；3.建议使用木瓜酶消化神经干细胞；4.木瓜酶的终止消化我之前都是稀释法，不知道还有没有更好的方法，请各位指教

作者: 安毓菡 时间: 2014-10-24 13:02

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感谢你的建议，我之前看到有的protocol上面用的胰酶和木瓜酶还有DNA酶复合物，我先准备用0.05%的胰酶做原代，用accutase做传代试一试。请问您的木瓜酶消化多久，浓度和剂量是怎么使用的啊，谢谢了~

作者: shaozi402 时间: 2014-10-24 16:07

木瓜酶浓度通常2mg/ml, 每次1ml，消化时间不太一致，通常15min-30min，观察消化情况决定消化时间。

作者: zb_ming 时间: 2014-10-25 00:57

之前样神经干细胞从来没用过胰酶消化，浓度和消化时间不好掌握。就是直接吹打的，细胞也长得好得很。尽量打散成单细胞，没事的，细胞接种密度大一点，增至很快的。

作者: 安毓菡 时间: 2014-10-25 09:10

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可是我直接吹打的吹不散，过滤后还是很多神经球，大的越来越大最后就变黑了。。。小的长的倒是还行，谢谢你的建议！

作者: 安毓菡 时间: 2014-10-25 09:11

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谢谢，下次试一试！

作者: zmdwj625 时间: 2014-10-27 10:51

1.酶消化对细胞的损失感觉要小些. 2.胰酶可以采用低浓度延长时间（我用成年鼠，0.125% 20-30min，37度），可加入DNA酶，终止后机械吹打，明显细胞缠绕和聚焦少得多。3。终止我用过BSA，感觉还可以。

作者: shaozi402 时间: 2014-10-27 21:24

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有无菌的BSA吗，怎么得到的？

作者: zmdwj625 时间: 2014-10-28 10:37

BSA用缓冲液配成一定浓度后，用0.22um或0.45um的滤膜过滤除菌

作者: 安毓菡 时间: 2014-10-28 21:53

回复 zmdwj625 的帖子: E4 x) u$ e9 w: Z, R( `

十分感谢，那请问你BSA的终浓度和用量分别是多少啊？

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