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楼主: hyde	go [请教] western 检测的蛋白表达量太少怎么办 [复制链接]

seandsa

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21楼

发表于 2015-1-23 09:17 |只看该作者

我以前也做过一个蛋白，表达很低，realtime时Ct将近29了。用RIPA裂解液怎么也检测不到，后来就像14L一样，用trizol提取，再等体积2*loading buffer煮，封闭用BSA，就检测到了。

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liuyasi2008

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22楼

发表于 2015-2-1 18:52 |只看该作者

做WB的话，可以用6Xbuffer，上样量提高到20ul，一抗浓度提高，一抗过夜，第二天可以复温30min，延长曝光时间。我们这边哺乳昆虫表达蛋白在小量表达的时候（主要是本身表达量就很低，只能WB检测，跑蛋白胶没有条带）都这么检测，不过用的是标签抗体。

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splinkerette

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23楼

发表于 2015-3-4 11:04 |只看该作者

几个方面吧：开始就把细胞量尽量增多些，点样时样品量上多点；一抗可以减少奶粉的浓度，虽然会背景会增高，但信号也会明显增强；超敏发光底物也是很有必要的，我们实验室用的胶片曝光，感觉比CCD灵敏且噪音少

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周小木

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24楼

发表于 2015-3-12 18:38 |只看该作者

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